ELISA方法检测IFN-α的表达
实验概要
ELISA方法检测IFN-α的表达并根据标准曲线定量。
主要试剂
Human IFN-α标准品
实验步骤
1. 建立标准曲线：将500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml，7.8 pg/ml，0 pg/ml的标准品各0.1ml依次加入一排8孔中，每个标准品均做复孔。
2. 加样：样品孔加细胞培养上清，100µl/孔，轻轻混匀30s，每个样品均做复孔。
3. 37°C反应90min，甩去板内的液体，用1×洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350μl洗涤液），并去除水滴；反复洗涤5次，每次均需拍干。
4. 将准备好的1×Biotin工作液按每孔0.1ml依次加入（TMB空白显色孔除外）。37°C反应60min。
5. 甩尽板内液体，用1×洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350μl洗涤液），并取出水滴；反复洗涤5次，每次均需拍干。
6. 将准备好的1×HRP工作液按每孔0.1ml依次加入。轻轻混匀30s，封住板孔，37°C反应30min。
7. 甩尽板内液体，用1×洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350μl洗涤液），并取出水滴；反复洗涤5次，每次均需拍干。
8. 每孔加入50μl 显色液A和50μl 显色液B，轻轻混匀10s，37°C暗室反应15±10 min。
9. 每孔加入100μl中止液（Stop Solution）。轻轻混匀30s，30min内在450nm处读OD值。
10. 所有OD值都应减去空白值后再计算。
11. 以标准品500、250、125、62.5、31.3、15.6、7.8和0 pg/ml的OD值在Excel上作图，得出标准曲线，以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线，求出方程。
12. 利用方程，根据样品OD值求出的含量。
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