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圆二色光谱仪谱带宽度

2018.7.01

谱带宽度

选为1 nm。对于高分辨率测量,要用较窄的狭缝宽度,此时光电倍增管的电压较高,谱的信噪比差。虽然对于正常测量最佳谱带宽度是1~2 nm,但是在下列情况下要牺牲分辨率而需要较宽的狭缝宽度。当样品的吸光度很高但CD信号很弱时,一方面要尽量保证测定CD峰所需要的足够浓度,另一方面要设置较宽的狭缝。不过此时要特别小心,因为样品在吸光度过高(A>2)的情况下可能存在荧光或杂散光引起的某些假象。另外,在固体CD光谱测试时也需要较大的狭缝宽度(一般要求 > 2 nm)。
  (2)椭圆率摩尔椭圆率都依赖于测量条件。因此,温度、波长和样品浓度总是应该特别注明的。
  (3) 当用压片法或石蜡油研磨法进行固体粉末样品测试时,要尽可能地研磨获得细小均匀的样品颗粒。采用石蜡油糊方法时,必须注意某些憎水有机化合物可能溶于石蜡油中,这时所得CD光谱在某种意义上应视为溶液CD光谱。采用压片法测试固体CD时,在保证手性样品的定性浓度达到CD光谱仪检测要求的同时,片越薄越透明越好(但切忌破损)。在某些情况下,压片法不适用于手性抗衡阴离子存在下的固体诱导CD光谱的测定。
  使用压片机须注意:
  ① FW-4型压片机极限压力24吨,对应压力表读数37.5 MP,超过此极限容易损坏机器,请不要随意加压。
  ② 一般用途的压片,加压至8吨(12.5 MP)即可,当KBr(或KCl)用量约50 mg时能获得较光滑均匀的片膜。
  ③ 使用压片机时如感觉压油手柄有压力,而压力表读数为0,请立即旋松油阀,检查压力表是否损坏。
  ④ 机器放置一段时间未使用,在使用前可旋紧放油阀,加压至15 MP,再旋松放油阀。如此反复几次,即可正常使用。
  ⑤ 压片完成后,请用棉花蘸取少量酒精将压片模具和研钵洗干净,置于红外灯下烘干后再将压片模具放回干燥器中。压片剩余的固体粉末和使用过的棉花倒入垃圾桶中。
  (4) 在紫外区进行光谱扫描时,J-810型CD光谱仪的耗氮量为:3 L/min(190~400 nm);3~5 L /min(185 nm);10 L/min(180 nm);30~50 L/min(175 nm);60~70 L/min(170 nm)。因此当测定蛋白等样品的远紫外光谱时,必须增加氮气的流量,以避免臭氧对紫外光产生的吸收干扰光谱的测定。
  (5) 对获取理想的溶液或固体CD谱图的建议:
  ① 手性样品符合CD光谱测试的条件(在给定波长范围内有较强的CD信号和合适的吸收值)。必须事先测定手性样品的UV-Vis吸收光谱(溶液或固体漫反射),预测CD谱峰的可能位置和选择合适的制样浓度(对于溶液吸收光谱,A ≈ 1)。
  ② 提供高对映纯度的手性样品。
  ③ 根据样品的性质选择测定方式(溶液、固体、单晶或荧光CD)。
  ④ 对溶液样品应选用合适的溶剂(见附表)、浓度和光程(与测定UV-Vis光谱类似)。对于在紫外区测试的样品建议选用较小的光程(≤0.5 cm)和截止波长足够低的溶剂,最好为高纯水或醇类溶剂(见附表)。
  ⑤ 对固体样品的压片法测试,应视样品的不同选用合适百分比浓度及合适的稀释剂( KBr、KCl或 CsI 等)研磨压片后进行透射扫描。
  ⑥ 选择适当的测定参数(波长范围、扫描速度、灵敏度和狭缝等)。
  ⑦ 对于同一个样品,在可能的条件下,建议同时做其溶液和固体CD光谱加以比较。
  ⑧ 如果可能,最好同时做一对对映体的CD光谱,以检查其CD信号的真伪和在定量的条件下互相印证其对映纯度。


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