紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量
紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量
一、实验目的
1. 进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV2550的操作。
2. 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。
3. 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。
二、实验原理
为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，其使用量一般在0.1%左右。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。
三、仪器和试剂
1. 紫外可见分光光度计 UV2550（日本岛津），25px石英比色皿，50ml容量瓶。
2. NaOH溶液（0.1mol/L）
3. 苯甲酸钠标准溶液的配制
(1) 苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。
(2) 苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。
(3) 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。
4. 市售饮料的配制
准确移取市售饮料0.5ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，用蒸馏水稀释定容。
5. 蒸馏水
四、实验步骤
1. 开机
(1) 打开计算机，打印机。
(2) 打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击“Connect”与仪器联机，仪器开始自检，通过后按“OK”。
2. 吸收光谱的测定
(1) 选择“Window”→“Spectrum”，打开光谱模块。
(2) 选择“Edit”→“Method”，设定波长范围（从大到小），扫描速度（Fast），采样间隔（1.0），扫描方式（Single），Instrument Parameters（Absorbence）。
(3) 样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Baseline”，启动基线校正，点击确定。
注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。(4) 参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点击按键条中的“Start”，测定紫外可见吸收光谱。
（5）扫描完成后，在弹出的新数据采集对话框中输入样品名，点击确定。
（6）图谱保存：选择“File” →“Save as”，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入文件名，保存类型中选择Spc，点击“保存”。
（7）最大吸收峰：选择“Operations” →“Peak Pick”，找到最大吸收峰对应的波长。
3. 标准曲线法测定待测样品的浓度
(1) 选择“Window”→“Photometric”，打开测量光度模块。
(2) 选择“Edit”→“Method”，设置合适的波长（“Wavelength”），如225nm，点击“Add”，点击选定的Wavelength，根据提示，点击next，next，方法，设定保存路径，点击“保存”。
(3) 样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Cell blank”，进行背景校正。
(4) 标准曲线：在Standard table框里输入Sample ID（从1开始），标准溶液的浓度“Concentration”，输入完毕，将光标移到WL225下。在样品池中由稀到浓，依次放入系列标准溶液，点击按键条中的“Read std”，依次读出标准系列溶液的吸光度值。（浓度为0 的空白液可先按“自动归零”后再读数）
(5) 点击“Graph” →“Standard Curve Statistics” →“Equation”，“Correlation Coefficient”， 得到标准曲线的方程和相关系数。
(6) 同样，样品池中放入待测溶液，在Sample table框里框里输入Sample ID，点击按键条中的“Read std”，读出待测溶液的浓度和对应的吸光度值。
4. 关机
点击菜单中“Instrument” →“configure” →“maintenance”，进入界面后点击“D2”、“W1”，关闭氘灯和钨灯，再点击按键条中 “Disconnect”，然后关仪器软件，最后关电脑和仪器电源。
五、数据处理
1. 苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。
2. 苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。
3. 样品中苯甲酸钠含量的测定。
六、注意事项
1. 试样和标准工作曲线的实验条件应完全一致。
2. 不同牌号的饮料中苯甲酸钠含量不同，移取时样品量可酌情增减。
