大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验
离心法
聚乙二醇相沉淀及层析法浓缩病毒
| 实验材料 | 病毒细胞 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 小牛血清 |
| 仪器、耗材 | 滤器 转子 |
| 实验步骤 |
1. 将产病毒细胞按1：10或1：20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10 cm 培养皿中，培养细胞至50%~90%汇片。
3. 收取上清，用0.45 μm 的滤器过滤，贮存于-70℃或-80℃，或马上进行滴定和浓缩。
4. 滴定病毒原液。
5. 对于大体积病毒原液，用无菌的250 ml 离心瓶和JA-14转子在4℃，25 000 g 离心20 min，对于小体积的病毒原液，用SW-27或SW-41Ti转子20 000 r/min 离心10 min。使用前，用70%乙醇淋洗离心管以防细菌污染。
6. 将上清直接倒入消毒的离心瓶中，用JA-14转子14 000 r/min 离心5~16 h，或用SW-27或SW-41Ti转子20 000 r/min 离心2 h。
8. 将病毒分装成5~50 μl 的小份，贮存于-70℃或-80℃。滴定经浓缩的或未经浓缩的病毒各1份。
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