加州鲈细菌性出血病的检测和防治
加州鲈又名大口黑鲈，隶属于鲈形目、鲈亚目、太阳鱼科、黑鲈属。加州鲈是广温肉食性淡水名贵鱼类，具有个体大、生长快、适应性强、肉味鲜美等优点。该鱼喜栖息于沙质或沙泥质且混浊度低的缓流静水中，是发展池塘养殖的重要经济鱼类之一；同时该鱼较贪食，易上钩，又是发展休闲渔业的好品种。
该实验对此次加州鲈病害的细菌性病原体为研究对象，通过分离纯化，形态学观察，结合16SrRNA基因序列同源性检索，对该病原菌进行初步判断；通过药敏实验，了解该病原菌对各种抗生素的耐药性和敏感程度，在此理论基础上，结合实际养殖情况和发病情况，对该病建立了有效的防治技术，治疗效果良好。
材料与方法
1.材料
苏州市天德水产科技有限公司提供的某养殖户的患病鲈鱼(濒死)若干条、BHI培养基、细菌基因组DNA提取试剂盒和药敏纸片(杭州微生物试剂有限公司)。
2.方法
(1)病例检验
2013年5月，对江苏省吴江市八坼镇附近加州鲈网箱养殖的发病情况、病理变化等进行检查。
(2)细菌分离与纯化
采用平板划线法，在BHI固体培养基上对濒死的患病加州鲈的肝、脾和肾等实质性器官进行接种培养。接种后将培养皿置于28℃生化培养箱中过夜培养。选择呈优势生长的单菌落，在BHI固体培养基上进行纯化培养，从而得到单一菌种，并对得到的纯菌株进行革兰染色镜检。
(3)16SrRNA基因序列的PCR扩增测序及同源性检索
对分离得到的纯菌株进行细菌基因组DNA进行提取后，采用16SrRNA基因通用引物进行扩增。
所用引物：27F：5ˊ-AGAGTTT?
GATC(C/A)TGGCTCAG-3ˊ
1492R：5ˊ-GGTTACCTTGT?TACGACTT-3ˊ(Martinetal,1998)
20μl反应体系，PCR反应条件为：94℃预变性2分钟，94℃变性1分钟，45℃复性1.5分钟，72℃延伸1.5分钟，30个循环后，72℃温育2分钟。
(4)药敏实验
采用纸片扩散法，病原菌接种BIH液体培养基，28℃震荡培养24小时，参照麦氏比浊管调整菌液浓度为1.0×108CFU/ml，将菌液均匀涂布在BIH平板上，贴上药敏纸片，28℃培养24小时，测量抑菌圈大小并判定结果。
(5)治疗方法
根据病原菌鉴定和药敏试验结果，以外用和内服相结合的方法进行治疗，外用药选用二氧化氯，内服药选用湖南威克尔的福康(氟苯尼考粉)和武汉华扬的盐酸多西环素粉。具体的治疗方法是按说明书的用量在网箱中使用二氧化氯，福康和盐酸多西环素粉以每次每1千克鱼体重分别用药0.1克~0.15克和0.02克的剂量进行拌料投喂，每日1次，连续用药7天。
实验结果
1.自然发病病例临床特征
发病加州鲈主要为2龄加州鲈，大小为25厘米左右，鳃充血，肛门红肿突出，尾鳍和腹鳍充血，背鳍基部有溃烂，解剖后，肝脾肿大，肝充血，脾黑红，气囊内壁充血，肌肉出血。
2.细菌分离
通过平板划线法进行分离和纯化，在患病加州鲈肝、脾和肾处都得到大小、形态一致的菌落，最终分离出单一的纯菌株。该菌在BHI固体培养基平板上培养24小时后，形成3毫米~4毫米，圆形光滑、边缘整齐、乳白色、中间凸起的菌落。革兰染色呈红色，为阴性杆状菌。
3.16SrRNA基因序列同源性检索
PCR扩增出该菌株的16SrRNA基因片段大小约为1500bp，测序结果表明其片段长度为1447bp。将该序列在GenBank数据库中与已报道的细菌基因序列进行Blast分析，结果发现该菌株与嗜水气单胞菌的同源性达99%，结合形态学初步判断该菌为嗜水气单胞菌。
4.药敏实验
由药敏实验结果可知，该菌对喹诺酮类(左氧氟沙星、诺氟沙星)、氯霉素类(氟苯尼考)、呋喃类(呋喃妥因)、四环素类(强力霉素)、头孢菌素类(头孢哌酮)和大环内酯类(新生霉素)等药物敏感，对磺胺类(磺胺异恶唑)、氨基糖苷类(链霉素)等药物不敏感或耐药。
5.治疗效果
根据病原菌的鉴定结果，选用二氧化氯为外用药，福康和盐酸多西环素为内服药，以网箱内泼洒二氧化氯溶液和投喂福康、盐酸多西环素相结合的方法进行治疗。用药后第4天，死鱼数量逐渐减少，鱼的摄食量也逐步增加，病情得到初步控制，用药一周后死鱼现象消失，治疗效果好。
