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沉降系数的测定方法

2022.4.25

沉降系数通过分析离心机测定。

通常只需要几十毫克甚至几十微克样品,配制成1~2毫升溶液,装入分析池,以几小时的分析离心,就可以获得一系列的样品离心沉降图。根据沉降图可以作样品所含组分的定性分析,亦可以测定各组分的沉降系数和估计分子大小,作样品纯度检定和不均一性测定,以组分的相对含量测定。 

(1)样品:蛋白质

(2)样品溶液与离心:将样品溶于缓冲液中,用一定规格的双槽分析池,一边加入溶液一边加入溶剂。分析池与平衡池平衡重量,使平衡池比分析池轻0.5g以内,然后分别装入分析转头。抽真空。开Schlieren光光源,选择工作速度,室温离心。转动腔达到真空后离心机开始运转加速,此时在观察窗口可以看到离心图型。达到工作速度后恒速离心。

以蛋白质为例待看到样品峰的尖端后即可以间隔照相。照完相即可关机,取出样品液,清理转头和分析池。照相用强反差显影冲洗后即得Schlieren光路沉降图形照片。

(3)沉降图像测量:Schlieren沉降图可以用比长仪,读数显微镜,或投影仪测量。测量时把沉降图像的底片放于测量仪器上,使液面的垂直线与测量仪中的垂直线重合,然后用十字标线依次测量内参孔,液面,界面峰尖,和外参考孔的位置,每个图像至少读测三次,取平均值。依次把每个图像依同样方法测量,把数据列成表。

(4)沉降系数S的计算:代入公式计算。


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