真菌原生质体（protoplast）制备技术
1． 灭菌物品：
（1） 大滤纸:
（2） 灭菌针筒（含脱脂棉和玻璃钎维）
（3） 脱脂棉
（4） 离心管
（5） 无菌ddH2O
（6） 0.6M MgSO4
（7） 培养基：
A. 等渗培养基（RCM）：麦芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡萄糖 0.4%，pH自然，用0.6M蔗糖配制。
B. 破膜培养基：麦芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡萄糖 0.4%，pH自然，用水配制。也可以采用含有0.6M蔗糖的PDA作为等渗培养基，破膜培养基不加0.6M蔗糖即可。
（8） 溶壁酶酶液：1.5%，用0.6MMgSO4配制，过滤除菌；
（9） 培养皿：根据样品个数
2． 制备方法：
（1） 称取离心管重量并记录；
（2） 用接种针挑出菌丝，并用灭菌双蒸水冲洗一次，然后用无菌的0.6M MgSO4冲洗两次，用灭菌的滤纸吸干，放入已知重量的离心管，称重并记录；
（3） 计算得到菌丝重量，按0.2（g）：1(mL)加入灭菌酶液，震荡均匀；
（4） 28℃，3~4小时，摇床震荡（轻微），酶解，同时每30min镜检观察原生质体数量；
（5） 灭菌注射器（含脱脂棉和玻璃钎维）过滤；
（6） 离心：2500rpm,2min
（7） 用0.6M MgSO4洗涤沉淀3次；
（8） 用用0.6M MgSO4定容至最初的加酶量；
（9） 镜检计数；记录；
（10） 涂板后再生培养，第7天后每隔1天计数一次。
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