人 (Human) 心肌型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒研究使用
标本:血清或血浆
试验原理:
H-FABP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知H-FABP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将H-FABP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中H-FABP的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T) 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品:40ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按说明书进行稀释
空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素标记的抗H-FABP抗体 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按说明书进行稀释
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
标本稀释液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型
自备材料:
1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性:
1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作步骤:
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空转移趋化生长因子β1孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案:
标准品浓度(ng/ml):
A 40 40 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 20 20 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 10 10 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D 5.0 5.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E 2.5 2.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 1.25 1.25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
人 (Human) 心肌型脂肪酸结合蛋白 (H-FABP) ELISA 检测试剂盒局限:
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能:
灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析:
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的H-FABP标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的H-FABP含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-40ng/ml
4、敏感度: 0.1 ng/ml