冰冻组织固定和蔗糖浸制实验
实验方法原理
实验材料 冰冻组织
试剂、试剂盒 PBSPFA蔗糖
实验步骤
1. 于4℃，在2%PFA固定液（做免疫组织化学时）或4%PFA固定液（做原位杂交时） 中，固定小的组织样品或分离的胚胎（如第7、第8天的小鼠胚胎）30 min。
2. 在PBS中清洗组织样品2次。
3. 在30%蔗糖中浸制样品，直至组织沉下（1~3 h至过夜）。
注意事项
1. 大的胚胎和一些组织，将需要固定达4 h，大的器官在由动物体解剖下之前，应在动物体内通过灌流进行原位固定。
2冰冻切片中，最常见的问题就是冰晶，防止冰晶，可以组织速冻或用不同浓度的蔗糖置换组织块的水分，通常用20%蔗糖，也可用20%-25%-30%蔗糖梯度置换，另外在配置蔗糖液时不能用蒸馏水配制，否则起不到脱水作用。组织块被蔗糖液浸泡时可析出许多水，因此要更换液体，直至组织块沉底。
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