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常见实验用溶液的配制方法（二）

2020.2.25

Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)

　　将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N)，用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）	pH
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76	9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2

　　二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

　　电泳缓冲液

　　50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水	242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L

　　5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液

成分及终浓度	配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水	54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L

　　染料

　　1%溴酚蓝(bromophenol blue)

　　加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

　　1%二甲苯青FF(xylene cyanoleFF)

　　溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

　　10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)

　　小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

　　凝胶上样液(gel loading solutions)

　　6×碱性凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型） 0.15％溴甲酚绿 0.25％二甲苯青FF 水	300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml

　　6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型）水	1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml

　　6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型）水	2.5ml 1％溴酚蓝 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml

　　6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油水	1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml

　　6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖水	1.5ml 1％溴酚蓝 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml

　　10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度	配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油水	20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 补足到10ml

　　三.常用培养基

　　LB培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	10g
酵母提取物	5g
氯化钠	10g

　　如果需要用1N NaOH(～1ml)调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

　　SOB培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	20g
酵母提取物	5g
氯化钠	0.5g
1 mol/L 氯化钾	2.5ml

　　用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

　　SOC培养基

　　成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌)。

　　TB培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	12g
酵母提取物	24g
甘油	4ml

　　各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH₂PO₄/0.72 mol/L K₂HPO₄的溶液(2.31g的K₂HPO₄和12.54gK₂HPO₄溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。

　　2×YT培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	16g
酵母提取物	10g
氯化钠	4ml

　　如果需要用1N NaOH(～1ml)调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

　　YPD培养基

　　将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	20g
酵母提取物	10g
葡萄糖	20g

　　用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

　　四.常用抗生素(antibiotic)

　　氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)

　　溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)

　　溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

　　溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

　　卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)

　　溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

　　溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　链霉素(streptomycin)(50mg/ml)

　　溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

　　溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

　　四环素(tetracyyline)(10mg/ml)

　　溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

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