ATCC细胞注意事项方法
ATCC细胞注意事项：
1、首先肉眼观察细胞培养基颜色，然后再借助显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张），这样做可方便后期的对比。
2、一定要用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要经过杀菌处理）。
3、严格按照在无菌环境下操作的原则，打开细胞培养瓶。
4、将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（要换新的培养基培养细胞）。
5、用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6、1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7、换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
ATCC细胞操作流程：
主要试剂与仪器：倒置相差显微镜），co2孵箱。
细胞的复苏培养传代及冻存：
细胞的复苏培养:从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,同时不断摇动使之迅速融化，然后用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
细胞传代:原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
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