抗体加补体的细胞毒试验方法
此法是组织相容性抗原（HLA）检查技术中最常用的一种方法.也称微量淋巴细胞毒试验.人体的组织相容性抗原存在于淋巴细胞膜的表面,从供者与受者的血液分离淋巴细胞作为靶细胞,以各种定型单价抗血清与家兔血清补体作为效应系统.如果淋巴细胞表面具有与抗血清相对应的抗原,则淋巴细胞就会受损伤或致死而被台盼蓝染色.
1、 材料：
a.淋巴细胞
b. 血清.小牛血清（56℃灭活30min）
c.待测血清.收集多产妇分娩时的胎盘剥离后的血,分出血清,叠氮纳防腐,4℃保存.
d.已知阳性对照血清.用上海市中心血站制备的马抗人淋巴细胞血清（ALS）,同时做1：3稀释.
e.补体.新鲜家兔混合血清,分装小试管,保存于-20℃.
2、 操作步骤：
a.在塑料试验盒内加入医用液体石蜡油20ml,放进一块52孔微量玻璃试验班,使板沉至盒底.
b.用0.25ml的微量定量加液器分别加入待测血清和阳性对照血清2-2ul/孔,阴性对照用Hanks液代之.加样针尖应磨平.
c.用同法每孔内加入待测的淋巴细胞2-3ul,应先加阴性对照和补体对照孔,然后加待测孔,最后加阳性血清对照孔,加后轻摇使其混匀,置室温作用1h.
d.每孔加入兔补体5-7ul（按加淋巴细胞顺序加入）,置37℃培育45min（或室温作用1h）.
e.每孔加入2%台盼蓝等渗液3-5ul室温中静置20min,吸去蓝色上清.
f.普通显微镜检查,记录每孔中死细胞（着色细胞）数.
死细胞.体积稍大,着蓝色,无折光性.
活细胞.大小正常,未着色,较透亮.
判断标准（每次实验,需做3-6个复本）.
其中着色细胞：《=20%为阴性, 20%--50%为弱阳性, 50%--70%为阳性, 》=70%为强阳性.
