双脱氧法DNA测序实验
测序酶进行标记测序反应
α-标记核苷酸进行热循环测序反应
实验材料 | DNA |
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试剂、试剂盒 | 寡核苷酸引物 测序酶终止混合液 测序酶缓冲液 焦磷酸酶混合液 |
仪器、耗材 | 离心机 离心管 微量滴定板 |
实验步骤 |
1. 对于每个单链模板:将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中
2. 对于每个双链DNA模板:以下列混合液重溶含0.5 pmol 变性双链模板的干燥沉淀物。
3. 当引物正和模板退火时,对应每个待测模板,分别标记好A、C、G、T 4个微量离心管。
3. 分别加入2.5 μl A、C、G、T 测序酶终止混合液至A、C、G、T管的底部
5. 将下列试剂加入已退火的引物和模板中
6. 加入3.5 μl 标记反应物至含测序酶终止混合物A的微量离心管中。
8. 加入4 μl 终止/加样染料液,于95℃水浴2 min,然后置于冰浴。
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