水质粪大肠菌群的测定滤膜法（二）
2 无菌滤膜：
直径50 mm,孔径0.45卩m的醋酸纤维滤膜，按无菌操作要求包扎，经12TC 高压蒸汽灭菌20 min,晾干备用；或将滤膜放入烧杯中，加入实验用水，煮沸灭菌3次，15 min/次，前2次煮沸后需更换水洗涤2~3次。
6. 3无菌水：取适量实验用水，经121°C高压蒸汽灭菌20 min,备用。
6.4 硫代硫酸钠（Na2S2O3*5H2O）。
6.5 乙二胺四乙酸二钠（CioHi4N208Na2.2H2。）。
6. 6 硫代硫酸钠溶液：p （NazSzCh） =0.10 g/ml
称取15.7 g硫代硫酸钠（6.4）,溶于适量水中，定容至100 ml，临用现配。
6.7 乙二胺四乙酸二钠溶液：p （Ci0Hi4N2O8Na2-2H2O） =0.15 g/ml
称取15 g乙二胺四乙酸二钠（6.5）,溶于适量水中，定容至100 ml,此溶液可保存30 d。
7仪器和设备
7. 1采样瓶：1L、500 ml或250 ml带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。
7.2高压蒸汽灭菌器：115°C、12 PC可调。
7.3恒温培养箱：允许温度偏差44.5°C ±0.5°C »
7.4过滤装置：配有砂芯滤器和真空泵，抽滤压力勿超过-50 kPa。
7.5 pH计：准确到0.1 pH单位。
7. 6培养皿：直径90 mm。
7.7 一般实验室常用仪器和设备。
注：玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎，121笆高压蒸汽灭菌20 min备用。
8样品
8. 1样品采集
点位布设及采样频次按照GB/T 14581、HJ/T494和HJ/T91的相关规定执行。
采集微生物样品时，采样瓶（7.1）不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。样 品采集量可根据水体实际情况而定，一般不少于250 ml。
采集河流、湖库等地表水样品时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，约距水 面10-15
cm处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水
中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的80%左右。样 品采集完毕后，迅速扎上无菌包装纸。
从龙头装置采集样品时，不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大，放水3〜5 min, 然后将龙头关闭，用火焰灼烧约3
min灭菌或用70%〜75%的酒精对龙头进行消毒，开足龙 头，再放水1 min,以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度，小心接入瓶内。
采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。
在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。
如果采集的是含有活性氯样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液（6.6）,以除去 活性氯对细菌的抑制作用（每125 ml容积加入0.1
ml的硫代硫酸钠溶液）；如果采集的是重 金属离子含量较高的样品，则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.7）,以消除干 扰（每125
ml容积加入0.3 ml的乙二胺四乙酸二钠溶液）。
注：15.7 mg硫代硫酸钠（6.4）可去除样品中1.5 mg活性氯，硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯 量调整。
8. 2样品保存
采样后应在2h内检测，否则，应10°C以下冷藏但不得超过6h。实验室接样后，不能 立即开展检测的，将样品在4°C以下冷藏并在2 h内检测。
9分析步骤
9. 1样品过滤
根据样品的种类判断接种量，最小过滤体积为10ml,如接种量小于10ml时应逐级稀释。 先估计出适合在滤膜上计数所使用的体积，然后再取这个体积的1/10和10倍，分别过滤。理 想的样品接种量是滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数为20〜60个，总菌落数不得超过200个。
当最小过滤体积为10 ml,滤膜上菌落密度仍过大时，则应对样品进行稀释。1:10稀释的方法 为：吸取10ml样品，注入盛有90 ml无菌水（6.3）的三角烧瓶中，混匀，制成1:10稀释样品。 样品接种量参考
表见表1。
表1接种量参考表
| 样品类型 | 接种量（ml） | ||||||||
| 100 | 10 | 1 | 0.1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 | ||
| 地表水 | 水源水 | ▲ | ▲ | ▲ | |||||
| 湖泊（水库） | ▲ | ▲ | ▲ | ||||||
| 河流 | ▲ | ▲ | ▲ | ||||||
| 废水 | 生活污水 | ▲ | ▲ | ▲ | |||||
| 工业废水 | 处理前 | ▲ | ▲ | ▲ | |||||
| 处理后 | ▲ | ▲ | ▲ | ||||||
| 地下水 | ▲ | ▲ | ▲ |
用灭菌镶子以无菌操作夹取无菌滤膜（6.2）贴放在己灭菌的过滤装置（7.4）上，固定 好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水（6.3）冲洗器壁2〜3次。样品过滤完成后， 再抽气约5 s,关上开关。
