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从脂肪组织提取蛋白的方法

2021.8.29

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤,从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易,但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型,被称为白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)。

脂肪组织中含有许多脂滴,蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白ji具挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法:

A.RIPA 缓冲液提取法:脂肪组织通过含有表面活性剂的缓冲液(例如 RIPA 缓冲液)匀浆,离心后,收集脂肪层下的液体组分为蛋白质,这种方法是相对简单的,但是蛋白质的产量非常低,因为表面活性剂经常导致蛋白质形成微小颗粒导致蛋白丢失。

B. 有机溶剂萃取 TCA 沉淀法:有以下三种方法:

1)脂肪组织通过蔗糖密度梯度离心,丙酮中加入三氯yi酸(TCA)-20℃ 过夜沉淀蛋白。

2)脂肪组织用有机溶剂提取液裂解(氯仿和甲醇的混合物),也如上用 TCA 沉淀。

3)脂肪组织用有机溶剂提取液(TEF 和氯仿)匀浆,通过离心将水相和氯仿相 分离,将其上的水相和交界面去除,并通过离心蒸发干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐,产量低。

C. 离心管柱提取法:这种方法利用了一种新的蛋白质提取技术,脂肪组织通过无表面活性剂的缓冲液匀浆,水油乳状液通过简单的冷冻后,离心使其通过特殊的离心管柱(有孔径,表面性质被处理过的)提取。



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