用逐步盐透析的方法组装核小体模板实验
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 准备如下的重组混合液： 约 8 ug 未标记的超声破碎的牛胸腺 DNA （作为载体 DNA； 加自 1～2 mg/ml 储液） 200 000～400 000 cpm 单独标记的 DNA 6.4 ug （组蛋白：DNA 为 0.8：1） 或 0.8 ug（组蛋白：DNA 为 1：1） 纯化的天然核心组蛋白（H2A/H2B 和 H3/H4） 160 ul 5 mol/L NaCl （终浓度 2.0 mol/L） TE 缓冲液，pH 8.0，至 400 ul。 2. 室温 30 min。 3. 将重组混合液加入 6000～8000 MWCO 透析袋中。 4. 在 1 L 含有 1～2 mol/L NaCl 的 TE 缓冲液，pH 8.0 中透析重组混合物，4℃ 透析 2 h。 5. 重组混合液连续在以下新鲜配置的透析缓冲液中进行透析，每次 4℃ 透析 2 h： TE 缓冲液，pH 8.0， 含有 1.0 mol/L NaCl TE 缓冲液，pH 8.0，含有 0.8 mol/L NaCl TE 缓冲液，pH 8.0，含有 0.6 mol/L NaCl 6. 在不含 NaCl 的 TE 缓冲液，pH 8.0 中透析重组混合物，4℃ 过夜。 7. 电泳检测核小体的完整性。 8. 在 10％～30％ 甘油梯度上从裸露的 DNA 上纯化组装好的核小体核心，100 000 g 离心 18.5 h。 展开 |
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