转座子 Tol2 的转座机制与转座优势详述（二）
当然，实践是检验真理的唯一标准，2009年，Zoltán Ivics等[3]就为大家详细阐述了Tol2转座机制在鼠中的应用，具体流程如图3，通过不断地表型筛选，Tol2系统可以用于构建转基因鼠和稳定的基因表达细胞系。
图3 利用Tol2构建转基因鼠和基因表达细胞系[3]
3、Tol2转座优势
与传统的转基因方法相比，Tol2转座子法优势明显，主要表现在以下几方面：
相对更高的转基因效率
不同品系小鼠中，同一转座子的转座效率存在差异，相同品系小鼠中，Tol2较SB、PB在生殖细胞中的转座效率更高[4]，如表1。
表1 不同转座子在生殖细胞中的转座效率
无位点特异性
相较于PB、SB，Tol2转座子靶点的选择性更高，没有明显的位点特异性（8-bp的杂合碱基序列），在染色体上比较倾向整合于基因的5＇端区域[3]，如表2。
表2 SB,PB和Tol2的基因组位点特异性比较
无碱基倾向性
Tol2转座子，插入位点的碱基序列可以不同，没有明显的碱基倾向性[5]。如表3。
表3 Tol2插入位点的碱基倾向性
无过度抑制效应
如下表4所示，随着转座酶与转座子的比例增大，PB转座效率逐渐饱和甚至出现下降趋势，表明过量表达的转座酶会抑制PB的转座反应，即过度抑制效应，但Tol2较之转座效率不受影响， 没有出现抑制效应[6]。
表4 PB，Tol2转座抑制效应比较
除此外，tol2转座无需绝缘子，可携带大片段外源DNA，目前百奥赛图已利用该系统成功将13kb外源DNA片段转入小鼠体内！
【参考文献】
[1] Koga A. and Hori H. The Tol2 transposable element of the medaka fish: an active DNA-based element naturally occurring in a vertebrate genome[J]. Genes & Genetic Systems, 2001, 76:1-8.
[2] DNA transposon-based gene vehicles - scenes from an evolutionary drive. J Biomed Sci. 2013 Dec 9;20:92.
[3] Transposon-mediated Genome Manipulations in Vertebrates. Nat Methods. 2009 June ; 6(6): 415–422.
[4] Efficient transposition of Tol2 in the mouse germline. Genetics. 2009 Dec;183(4):1565-73.
[5] A simple and highly efficient transgenesis method in mice with the Tol2 transposon system and cytoplasmic microinjection. Genomics. 2010 May;95(5):306-11.
[6]. Efficient genetic modification and germ-line transmission of primordial germ cells using piggyBac and Tol2 transposons. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jun 5;109(23):E1466-72.
