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蛋白质含量测定法--凯氏定氮法

2021.12.02

  本法系依据蛋白质为含氮的有机化合物,当与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化时使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸液吸收后以硫酸滴定液滴定,根据酸的消耗量算出含氮量,再将含氮量乘以换算系数,即为蛋白质的含量。

  本法灵敏度较低,适用于0.2~2.0mg氮的测定。氮转化成蛋白质的换算系数因蛋白质中所含氨基酸的结构差异会稍有区别。

  供试品溶液的制备

  照各品种项下规定的方法制备,生物制品按如下方法操作。

  精密量取供试品(如供试品为冻干制剂或固体粉末时,应复溶后量取)适量,用0.9%氯化钠溶液定量稀释,制成每1ml中含氮量约1mg的溶液,精密量取1ml,作为总氮供试品溶液进行测定。非蛋白氮供试品溶液的制备,除另有规定外,照附注项下钨酸沉淀法操作,即得。

  测定法

  除另有规定外,按测定法(1)操作,生物制品按测定法(2)操作。

  (1)本测定法适用于不含无机含氮物质及有机非蛋白质含氮物质的供试品。精密量取各品种项下规定的供试品溶液适量,置凯氏定氮瓶中,照氮测定法(通则0704第二法或第三法)测定供试品溶液的含氮量。除另有规定外,氮转换为蛋白质的换算系数为6.25。

  (2)本测定法适用于添加无机含氮物质及有机非蛋白质含氮物质的供试品。除另有规定外,精密量取各品种项下规定的总氮及非蛋白氮供试品溶液适量,分别置凯氏定氮瓶中,照氮测定法(通则0704第二法或第三法)测定,以总氮量减去非蛋白氮量即为供试品溶液的含氮量。除另有规定外,氮转换为蛋白质的换算系数为6.25。

  【附注】非蛋白氮供试品溶液制备常用方法

  钨酸沉淀法

  精密量取供试品(如供试品为冻干制剂或固体粉末时,应复溶后量取)适量(蛋白质含量不高于0.2g),置20ml量瓶中,加水10ml,加10%钨酸钠溶液2.0ml,0.33mol/L硫酸溶液2ml,加水至刻度。或精密量取上述供试品2ml,加水14.0ml,10%钨酸钠溶液2.0ml,0.33mol/L硫酸溶液2.0ml。摇匀,静置30分钟,滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得(可依据蛋白质浓度适当调整10%钨酸钠溶液及0.33mol/L硫酸溶液用量,使钨酸终浓度保持1%)。

  三氯醋酸沉淀法

  精密量取供试品(如供试品为冻干制剂或固体粉末时,应复溶后量取)适量(蛋白质含量6~12mg),加等体积的10%三氯醋酸溶液,混匀,静置30分钟,滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得(可依据蛋白质浓度适当调整10%三氯醋酸溶液用量,使三氯醋酸终浓度保持5%)。


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