蛋白质含量测定法--福林酚法（Lowry法）
本法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。
本法灵敏度高，测定范围为20～250μg。但对本法产生干扰的物质较多，对双缩脲反应产生干扰的离子，同样容易干扰福林酚反应，且影响更大。如还原物质、酚类、枸橼酸、硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。
除另有规定外，按方法1操作；如有干扰物质时，除另有规定外，按方法2操作并需经方法学验证。
方法1：
试剂
碱性铜试液
取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合作为乙液。临用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。
对照品溶液的制备
除另有规定外，取血清白蛋白（牛）对照品或蛋白质含量测定国家标准品，加水溶解并制成每1ml中含0.2mg的溶液。
供试品溶液的制备
照各品种项下规定的方法制备（蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致）。
测定法
精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml（对照品溶液取用量可在本法测定范围内进行适当调整），分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，室温放置10分钟，各加入福林酚试液[取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→16]4.0ml，立即混匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在650nm的波长处测定吸光度；同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程。另精密量取供试品溶液适量，同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得。
方法2：
测定前将脱氧胆酸盐-三氯醋酸加入样品中，通过将蛋白质沉淀来去除干扰物质。这种方法也可用于将稀溶液中的蛋白质浓集。
试剂
试液A
取1%氢氧化钠溶液200ml与5%碳酸钠溶液200ml混合，加水稀释至500ml。
试液B
取2.98%二水合酒石酸二钠溶液100ml与1.25%硫酸铜溶液100ml混合，加水稀释至250ml，临用新制。
试液C
取试液A与试液B按50：1的比例混合，临用新制。
福林酚试液
取福林试液中的贮备液（2mol/L酸浓度）1→2（所配得的福林酚试液应满足以下要求：取供试品溶液1ml，加试液C 5ml和配好的福林酚试液0.5ml，所得溶液的pH值应为10.3±0.3。若溶液pH值超出范围，应适当调整福林酚试液的稀释倍数）。
去氧胆酸钠试液
取去氧胆酸钠适量，加水制成每1ml中含1.5mg的溶液。
对照品溶液的制备
除另有规定外，取血清白蛋白（牛）对照品或蛋白质含量测定国家标准品适量，加水分别制成每1ml中含0.00mg、0.01mg、0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg的溶液（对照品溶液浓度可在本法测定范围内进行适当调整）。
供试品溶液的制备
照各品种项下规定的方法制备（蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致）。
测定法 精密量取各对照品溶液1.0ml，分别置玻璃试管中，加入去氧胆酸钠试液0.1ml，涡旋混匀，室温放置10分钟，加入72%三氯醋酸溶液0.1ml，涡旋混匀，在3000g条件下离心30分钟，轻轻倒出上清液，用吸管将剩余液体移除。蛋白质沉淀用试液C 1ml复溶后，再加入试液C 5ml，混匀，室温放置10分钟，加入福林酚试液0.5ml，立即混匀，室温放置30分钟，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在750nm的波长处测定吸光度；同时以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程。另精密量取供试品溶液1.0ml，同法测定。从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得。
