双转盘共聚焦技术在药物研发和细胞功能学中的应用-2
2、独家内置移液加样模块：高效胜任钙流反应和急性药物毒性反应
另外值得一提的是，CV8000独家内置移液加样模块，分别配置细胞板、化合物板、tips板位，机械臂抓取枪头后吸取化合物置于细胞板内，迅速反应后观察短时生物学反应，更好的胜任如钙流反应和急性药物毒性反应。
图3. 钙流反应
3、CAR-NK对类器官选择揭秘：CV8000完美捕捉靶向杀伤全过程
目前CAR-T细胞在血液肿瘤治疗取得了不错的结果。然而，对于像结肠直肠癌(CRC)这样的实体肿瘤，需要新的模型来测试CAR工程细胞在组织样环境中的细胞毒性。基于此，德国Georg-Speyer-Haus肿瘤生物和实验治疗研究所的Henner
Farin课题组开发了一个体外平台来研究CAR-NK92细胞对结肠癌类器官的杀伤作用，借助Yokogawa高内涵分析系统进行了活细胞成像及杀伤作用统计分析。
图4. 使用活细胞成像观测EPCAM-CAR-NK细胞对癌类器官的靶向杀伤作用，观测时长10H，观测结果表明，CAR-NK细胞的靶向作用相比亲本NK细胞显著提高。（绿色：表达GFP的癌类器官；紫色：NK细胞）
图5.
使用活细胞成像观测CAR-NK细胞对类器官的选择性，观测时长10
h，观测结果表明，CAR-NK会定向靶向癌类器官而对正常类器官无明显影响（绿色：表达EGFR突变体EGFRvIII的结直肠癌类器官；红色：DsRED标记的正常类器官；紫色：表达抗EGFRvIII蛋白的NK细胞
4、阿尔兹海默病因迄今未明：双转盘共聚焦助力揭示AD病理生理
2019年3月，日本京都大学的Minako
Hoshi研究团队在Cell子刊iScience上发表了关于AD发病机制的新成果。他们发现淀粉样蛋白球体在兴奋性神经元的反式高尔基网积累，并首先转移到轴突。抑制蛋白酶体使得淀粉样蛋白球体在反式高尔基网增加，并被转运到树突。淀粉样蛋白球体外泌后，导致临近NAKα3阳性神经元降解，随后，分泌淀粉样蛋白球体的神经元非凋亡性死亡。发现揭示了淀粉样蛋白球体表达水平和蛋白酶体功能的关联，对揭示AD的病理生理有重要作用。
YOKOGAWA的双转盘共聚焦高内涵系统，实现了高通量的共聚焦成像及定量分析统计，可准确定量β-淀粉样蛋白聚集体(ASPD)在兴奋神经元中的聚集水平（图6）及ASPD对邻近NAKα3神经元的杀伤作用（图7）。
图6.
神经元细胞转染淀粉样蛋白前体（APPswe），并经蛋白酶体抑制剂MG132处理后，ASPD只在Math2阳性的兴奋性神经元细胞中积累，而在小清蛋白(PV)和钙结合蛋白（calbindin）阳性的抑制性神经元细胞中不积累。（MAP-2用来标记神经元的树突和轴突）
图7. ASPD具有神经毒性，导致NAKα3阳性神经元细胞死亡
该课题组在2003年于AD患者脑内发现了由30个β-淀粉样蛋白（Aβ）聚集体，即ASPD，具有神经毒性，会导致神经元细胞发生退行性病变，并发现Na+-K+-ATPaseα3(NAKα3)是ASPD介导神经退行性病变的唯一靶点。在此基础上，他们研究了蛋白酶体与ASPD的关系，发现抑制蛋白酶体的活性,
显著增加兴奋神经元内的ASPD水平，并改变ASPD在神经元内的分布，同时，分泌的ASPD杀死邻近的NAKα3阳性神经元。这些发现加深了我们对AD患者大脑中Aβ聚集体形成和传递的理解，为将来研发治疗AD的药物开辟了可能。
5、结束语
CV8000作为新一代的多功能高内涵分析平台，配备了独家的CSU-X1双转盘共聚焦扫描单元。该系统光利用率高，低光漂白、低光毒性，可以对活细胞长时间动态观察；系统物镜和图像自动对焦，Z轴多层拍照结合MIP（Maximum
Intensity
Projection），可对非同焦平面的像素成像，结合成像速度优势，可快速对3D类器官快速逐层拍照，在同类产品中是类器官成像的利器。我们期待CV8000不断助力新药筛选、药敏分析、疾病发生机制的研究，促进科研成果的临床转化，并在新冠病毒药物筛选及疫苗研发中贡献一臂之力。
