细胞培养中血清的解冻及热灭活
细胞培养用血清解冻与热灭活常见问题
一、保存血清的方法
建议血清应保存在-5 ℃至-20 ℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
二、如何解冻血清才不会使产品质量受损?
建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8 ℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
三、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?
血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400 g 稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。
四、为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES 细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
五、有必要做热灭活吗?
实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量!
六、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?
胎牛血清没有预老化，储存在2-8 ℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20 ℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
七、如何避免沉淀物的产生?
建议您在使用血清的时候，注意下列的操作：
解冻血清时请按照所建议的逐步解冻法(-20 ℃至4 ℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20 ℃至37 ℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。解冻血清时请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
