硫酸多黏菌素B的检查方法
检查
酸度取本品,加水制成每1ml中含20mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为5.0~7.0溶液的澄清度与颜色取本品5份,分别加水制成每1m1中含50000单位的溶液,溶液应澄清无色(通则0902第法和通则0901第一法)。硫酸盐取本品约0.250g,精密称定,加水100ml使溶解,用浓氨溶液调节pH值至11,精密加氯化钡滴定液(0.1mol/L)10ml及酞紫指示液5滴,用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定,注意保持滴定过程中的pH值为11滴定至紫色开始消褪,加乙醇50ml,继续滴定至紫蓝色消失并将滴定的结果用空白试验校正。每1m氯化钡滴定液(0.1mol/L)相当于9.606mg硫酸盐(SO)。本品含硫酸盐按无水物计算应为15.5%~17.5%。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品50mg,精密称定,置100m1量瓶中,加水-乙腈(80:20)溶解并定量稀释至刻度,摇匀。标准品溶液(1)精密称取多黏菌素B标准品50mg,置100ml量瓶中,加水-乙腈(80:20)溶解并定量稀释至刻度摇匀。标准品溶液(2)精密量取标准品溶液(1)1ml,置100m量瓶中,用水乙腈(80:20)稀释至刻度,摇匀。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以硫酸钠溶液(取4.46g无水硫酸钠溶解在900ml水中,用稀磷酸调节pH值至2.3后用水稀释至1000m)-乙腈(80:20)为流动相;柱温为30℃;检测波长为215mm;进样体积20l系统适用性要求标准品溶液(1)色谱图中,多黏菌素B1峰的保留时间约为35分钟,多黏菌素B2、多黏菌素B3、多黏菌素B1-I与多黏菌素B1的相对保留时间分别约为0.50.55、0.8与1.0。多黏菌素B2峰和多黏菌素B3峰间的分离度应不小于3.0测定法精密量取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图至最大组分多黏菌素B1峰保留时间的1.4倍限度供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,按面积归化法计算,单个杂质不得过3.0%,杂质总量不得过17.0%小于标准品溶液(2)主峰面积0.7倍的峰忽略不计。苯丙氨酸照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品约0.375g,精密称定,置100m1量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀。测定法取供试品溶液,在264nm(A24)、258nm(A258)、252nm(A252)、280nm(A280)与300nm(A30)的波长处分别测定吸光度。按下式计算硫酸多黏菌素B中苯丙氨酸的百分含量(%)(9.4787/W)(A258-0.5A252+0.5A264-1.84A280+0.8A20)式中W为硫酸多黏菌素B供试品的重量(g)。限度按干燥品计算,含苯丙氨酸应为9.0%~12.0%。干燥失重取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥3小时,减失重量不得过6.0%(通则0831)。炽灼残渣取本品1.0g,依法检查(通则0841),遗留残渣不得过0.75%重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣,依法检查(通则0821第二法),含重金属不得过百万分之二十。多黏菌素B组分照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液、标准品溶液(1)、色谱条件与系统适用性要求见有关物质项下。测定法精密量取上述两种溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至最大组分多黏菌素B1峰保留时间的1.4倍。限度按外标法以相应峰面积计算,按干燥品计,多黏菌素B3的含量不得过6.0%,多黏菌素B1-I的含量不得过15.0%,多黏菌素B1、B2、B3和B1I的总含量不得少于80%。可见异物取本品5份,分别加微粒检查用水溶解,依法检查(通则0904),应符合规定。(供无菌分装用) 不溶性微粒取本品,加微粒检查用水溶解,依法检查(通则0903),每1g样品中,含10m及10m以上的微粒不得过6000粒,含25m及25m以上的微粒不得过600粒。(供无菌分装用)热原取本品,加灭菌注射用水制成每1ml中含2万单位的溶液,依法检查(通则1142),剂量按家兔体重每1kg注射lml,应符合规定。(供注射用)无菌取本品,用适宜溶剂溶解并稀释后,经薄膜过滤法处理,依法检查(通则1101),应符合规定。(供无菌分装用)
