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HPLC日常操作注意事项

2019.10.30

选择流动相时应注意的几个问题:


  • 尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。

  • 避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。

  • 试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积。

  • 流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时,流动相不应有较强的紫外吸收,一般检测波长应大于流动相的截止波长。


泵的维护保养:

  •  防止任何固体微粒进入泵体,否则会磨损柱塞、密封环缸体和单向阀,因此应预先对流动相进行过滤,可采用Millipore滤膜(0.22μm或 0.45μm )等过滤。泵的入口都应该连接砂滤棒(或片), 输液泵的滤器应经常更换。

  • 流动相不应含有任何腐蚀性物质, 含有缓冲液的流动相不应保留在泵内, 尤其是停泵过夜或更长时间。分析工作结束后必须用纯水充分清洗后,再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合固定相,可以是甲醇或甲醇和水)

  • 泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完,否则空泵运转也会磨损柱塞、密封环或缸体,最终产生漏液。

  • 输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力,否则会使高压密封环变形,产生漏液。


紫外检测器维护保养:

  • 流通池进入气泡会干扰基线,并极难排出,应使用充分脱气的流动相,以减少气泡的产生。

  • 应定期冲洗系统,避免流通池干涸。

  • 检测器中氘灯( 光源) 随着使用时间的增加,氘灯强度降低,噪音会不断增大,故分析前柱平衡得差不多时,再打开检测器,分析工作结束及时关闭检测器(频繁开关检测器也会缩短检测器寿命,一般开启间隔少于4小时,不建议关闭检测器)。 

  • 尘埃在静电的作用下容易覆盖在光学元件上, 使光传播效率降低,增加了光散射, 影响分析效果, 因此检测器周围的环境应保持清洁。


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