石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)（一）
实验方法原理
石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称 H.E. 对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过 HE 染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
实验材料 鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
试剂、试剂盒 中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液1%伊红酒精溶液1%盐酸酒精溶液甘油蛋白粘片剂中性树胶。 卡诺固定液埃利希苏木精染液1%伊红酒精溶液1%盐酸乙醇液各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）二甲苯甘油蛋白粘片剂
仪器、耗材 切片刀切片机恒温箱蜡杯酒精灯解剖刀解剖剪解剖盘培养皿镊子单面刀片毛笔包埋盒染色缸盖玻片载玻片玻片盘树胶树胶瓶显微镜温度计脸盆水浴锅温台剪刀解剖针小台木染色缸烧杯水盆熔蜡炉
实验步骤
一、试剂配法
1．中性甲醛固定液：
甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度） 100mL
磷酸氢二钠 6.5
磷酸二氢钾（钠） 4g
双蒸水 900mL
2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品
3．1%盐酸乙醇液
盐酸 1份
70%酒精 100份
4．甘油蛋白贴片剂：
蛋白 50 ml
甘油 50 ml
水杨酸钠（防腐剂） 1g
配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。
二、实验步骤
1．取材
颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。
切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。
注意事项：
（1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。
（2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。
2．固定
将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30－50min。
注意事项：
（1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。
（2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。
（3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。
（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。
3. 洗涤
材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。
4. 脱水
材料依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。各
注意事项：
（1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。
（2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。
（3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。
（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。
（5）如需过夜，应停留在70%酒精中。
（6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象
