融合蛋白化学降解实验—— 用溴化氰
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 实验步骤 | 1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重悬于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中，室温下反应。 2. 在 0、8、24 及 48 h 的时刻，各取 5 μl 并冻干。 3. 往所有冻干样本加 20 μl 1 × SDS 样品缓冲液，煮沸 10 min，加样于 SDS-聚丙烯酰胺凝胶。 4. 分析凝胶电泳结果以确定完全裂解蛋白质所需的最短温育反应时间。 展开 |
| 注意事项 | 1. CNBr 有剧毒，须在通风橱中操作，使用及弃置均应小心谨慎。 2. 当蛋白质对 CNBr 的裂解有抗性时或当待裂解的为不溶性融合蛋白时，可在反应中加入盐酸胍至终浓度为 6 mol/L。 |
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