激光扫描共聚焦显微镜使用说明
激光扫描共聚焦显微镜可以:(1)光切片扫描、3D图像处理、时间序列拍摄成像;(2)细胞、绿荧光蛋白、生物荧光样品观察分析;(3)荧光原位杂交分析。
实验方法原理 | 激光共聚焦扫描显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。 由于激光束的波长较短,光束很细,所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力,大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可以获得样品不同深度层次的图像,这些图像信息都储于计算机内,通过计算机分析和模拟,就能显示细胞样品的立体结构。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、观察及仪器操作
1. 开启仪器电源及光源
2. 设置相应的扫描方式
3. 获取图像
4. 关闭仪器
二、获取三维图像
1. 开启“Z-Stack”选项。
2. 确定光学切片的位置及层数。
3. 启动“Start”,获得三维图像。
三、获取时间序列图像
展开 |
注意事项 | 1. 仪器周围要远离电磁辐射源;
2. 环境无震动,无强烈的空气扰动;
3. 室内具有遮光系统,保证荧光样品不会被外源光漂白;
4. 环境清洁;
5. 控制工作温度在5~25℃。 展开 |
其他 | 激光扫描共聚焦显微镜可测定的样品种类很多.包括生物材料、组织(切片)、细胞(亚细胞)结构等。样品中荧光的来源主要有如下几种:自发荧光(autofluorescence)、荧光染色、免疫荧光、荧光蛋白、诱发荧光(induced fluorescence)及酶致荧光(enzymatically produced fluorescence)等等。其中大部分荧光素的激发和发射波长均可在仪器自带软件的染料信息库中找到。 |