用肽适配体正向分析细胞过程实验
实验方法原理
实验材料 用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库
试剂、试剂盒 完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板
仪器、耗材 30℃ 培养箱
实验步骤
1. 用高效乙酸锂转化法将 50～100 ug 肽适配体库（在 pJM-2 或 pJM-3 中）转化酵母筛选株（106～107 转化株）。将转化株涂布到 10 cm Glu/CM-Trp 平板上并于 30℃ 培养至克隆直径为 1 mm （2～3 天）。
2. 收集酵母细胞，测定平板效率。
3. 接种 10 个库等价物到 1 ml Gal/Raf/CM-Trp 液体培养基中。于 30℃ 振荡培养 4 h。
4. 室温下，于 3000 g 离心 4 min。吸去上清，将酵母沉淀重悬于无菌水中。
5. 将酵母涂布到 10 cm Gal/Raf/CM-Trp 筛选平板上并于选择条件下培养。
6. 将阳性克隆划线接种到 Glu/CM-Trp 主平板上。
7. 将主平板复印到 Glu/CM-Trp 和 Gal/Raf/CM-Trp 平板上并于选择条件下培养以确 定半乳糖依赖表型。
8. 从呈现半乳糖依赖表型的酵母株中提取肽适配体表达质粒（pJM-2 或 pJM-3）。
9. 将提取的质粒转入筛选酵母株中并测试半乳糖依赖表型以再次确认肽适配体的表型。
10. 提取肽适配体表达质粒用于测序及靶点鉴定（见辅助方案）。
注意事项
其他
1. 材料
用于遗传学筛选的酵母株
肽适配体库：pJM-2 或 pJM-3
2. 试剂
完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板，补加 2％ （m/V）糖（Glu） 或 2％ （m/V） 半乳糖和 1 ％ （m/V）棉籽糖（Gal/Raf）：
Glu/CM-Trp （10 cm 平板）
Gal/Raf/CM-Trp （10 cm 平板和液体培养基）
3. 耗材
30℃ 培养箱
