断裂型内合肽介导的蛋白质环化的特征介绍
环化蛋白质具有3个明显的特性：
①提高稳定性和活性，这是由于环化的蛋白质可以减少非折叠状态的构象熵值；
②折叠速度快，这是因为其减少了折叠途径的数目的缘故；
③对N端和C端特异性的蛋白酶具有抗性，因此能改善在体内的稳定性。
由于以上特性，环化蛋白质在蛋白质工程和医药工业中备受重视。以IMPACT～TWIN(NEB公司产品)和SICLOPPS为代表的2种载体分别被构建，用于体外和体内环化蛋白。IMPACT一rWIN用于表达“N端内含肽一靶蛋白一C端内含肽”形式的融合蛋白。在体外纯化后，经pH及巯基诱导切割此产物产生N端的半胱氨酸和C端的巯酯键，在低浓度下有利于靶蛋白分子内末端连接反应形成环状分子，而在高浓度下则促进分子之间末端的连接，从而产生串联的多聚产物，然后通过内含肽介导的连接方式(intein—mediatedproteinligation，IPL)由N端半胱氨酸攻击C端巯酯键。天然存在的SspDnaE断裂型内含肽两端片段具有很强的亲和性，靶蛋白基因被插入C端和N端之间形成一个三明治结构，经剪接后靶蛋白的N端和C端在体内通过正常的肽键连接而产生环化产物。相对于体外环化系统来说，目的蛋白在体内不须化学处理在细胞内进行自我环化反应，因此具有广泛的应用价值。通过控制温度表达DnaE内含肽也可以在体外环化蛋白，以便纯化产物。除了SspDnaE以外，PI—PfuI和RecA内含肽也得到成功应用。
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