一、实验试剂:
1. 154mmol/L氯化钠溶液.
2. 1.8mol/L过氯酸:取含水量为70%-72%过氯酸28ml,加蒸馏水稀释200ml并标定之.
3. 17.74mmol/L磷钨酸溶液,称取磷钨酸5g溶于2mol/L盐酸中并加至100ml。
4. 酚试剂:于1500ml球形烧瓶中加钨酸钠100g,铝酸钠(Na2MoO4·2H20)25g,水700ml,浓磷酸50ml,浓盐酸100ml:缓缓用细流蒸馏10h。取下冷凝管,加硫酸锂75g,蒸馏水50ml,并加溴水2-3滴,再煮沸15min,以除去多余的溴,冷却后稀释至1000ml,制成的酚试剂为鲜明黄色,置棕色瓶保存,用前取出一部分,以等量蒸馏水稀释之。
5. 1.88mol/L碳酸钠溶液。
6. 标准酪氨酸溶液(1ml=0.05mg);精确称取酪AA5mg,以0.lmol/L盐酸溶液并稀释至100ml。
二、实验操作:
血清0.5ml,加154mmo/L氯化钠4.5ml,混匀,1.8mol/L,过氯酸溶液2.5ml,静止10min,用定量滤纸过滤或离心.取溶液2.5ml,加17.74mmol/L磷钨酸0.5ml混匀,静止10min,以3000r/min离心10min,倾去上清液沥干,再加磷钨酸溶液2ml,悬浮沉淀物,同法离心后倾去上清液.取沉淀备用。
按下表测定
混匀,放置37℃水浴15min,取出比色,用分光光度计650nm,比色杯光径1.0cm,以空白管调零,读取各管吸光度。
三、计算:
血清粘蛋白(g/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×1.785血清粘蛋白(mg/L)(以酪氨酸计)测定吸光度/标准管吸光度×75
参考值:以蛋白计为0.71-0.87g/L
以酪氨酸计为33.8土27mg/L 展开 |