分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

乳制品中L-羟脯氨酸的检测（一）

2020.3.18

1 前言

“皮革奶”添加物的主要成分是皮革水解蛋白(即动物皮毛，含大量角质蛋白质)，其中劣质水解蛋白的生产原料主要来自制革工厂的边角废料，制革边角废料中含有重铬酸钾和重铬酸钠，用这种原料生产水解蛋白，重铬酸钾和重铬酸钠自然就被带入产品中，被人体吸收。食品专家介绍，皮革水解物主要添加的食品是乳与乳制品及含乳饮料，作用是增加蛋白质含量。主要检测方法是检查牛奶中是否含有L-羟脯氨酸，这是动物胶原蛋白中的特有成分，在乳酪蛋白中则没有，所以一旦验出，则可认为含有皮革水解蛋白。本实验提供了乳制品中L-羟脯氨酸的检测方法，采用DNFB柱前衍生法进行分析测定。

2 仪器配置与试剂

2.1 仪器、前处理设备及试剂盒配置

表1 L-羟脯氨酸检测标准配置

序号	名称	订货号
1	P1201 高压二元梯度系统
2	氨基酸分析专用色谱柱	31110091
3	氨基酸专用保护柱
4	氨基酸试剂盒	31990001
5	L-羟脯氨酸标准品

表2 氨基酸试剂盒组分表

序号	名称
1	氨基酸衍生化溶液
2	衍生缓冲固体组分A
3	衍生缓冲固体组分B
4	平衡缓冲固体组分A
5	平衡缓冲固体组分B
6	流动相B固体组分

表3 前处理设备配置

序号	名称
1	恒温水浴锅
2	氮吹仪
3	溶剂过滤装置
4	流动相超声装置
5	烘箱
6	0.45μm针孔式微孔滤膜
7	5mL水解用安瓿瓶
8	封口膜

2.2 其他

25mL棕色容量瓶、50mL棕色容量瓶、移液枪、移液枪枪头、一次性PVC手套、一次性口罩、氮气瓶、2mL塑料离心管、进样针等。

2.3 试剂及相关溶液配制

2.3.1 衍生缓冲溶液

称取衍生缓冲液固体组分A 1.24g，固体组分B 7.63g，加入至500mL量瓶中，定容并摇匀后备用。

2.3.2 平衡缓冲溶液

称取平衡缓冲液固体组分A 0.91g，固体组分B 3.58g，加入至250mL量瓶中，定容并摇匀后备用。

2.3.3 羟脯氨酸标准溶液

将羟脯氨酸标准品用衍生缓冲溶液定容至250mL容量瓶中，备用。

2.3.4 流动相A

乙腈-水（1:1），相同体积的乙腈与水混合，超声脱气10～15min。

2.3.5流动相B

称取流动相B 固体成分4.1g加水约950mL，用冰醋酸调pH至6.4~6.8，加10mL N,N-二甲基甲酰胺，加水定容至1000mL，摇匀后静置片刻，用0.45μm微孔滤膜过滤，超声脱气10～15min。

3 实验方法

3.1 样品水解

准确称取适量样品于5mL安瓿瓶中，精确到0.0001g(使试样中蛋白质含量在10～20mg范围内)，加入3mL 6mol/L盐酸。含水量高的样品如牛奶，可加入等体积的浓盐酸。酒精灯高温拉丝封口,放入烘箱中110℃ 水解24h。水解液氮气吹干，用衍生缓冲溶液多次洗涤安瓿瓶，合并洗涤液转移至25mL容量瓶中，并用衍生缓冲溶液定容，备用。