细胞该怎么冻存，一篇文章告诉你
人小梁细胞主要功能：
（1） 人小梁网细胞分离自人眼的近小管组织和角巩膜区域。
（2） 小梁网细胞在房水流动机制中发挥重要作用。
（3） 在小梁网细胞中有特定的神经递质和神经肽受体，其中包括肾上腺素，乙酰胆碱和神经肽Y。
（4） 小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。
材料准备：
1. 仪器：净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱（4℃、-20℃、-70℃）、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。
2. 玻璃器皿：吸管（弯头、直头）、 培养瓶、玻璃瓶（250ml、100ml）、废液缸。
3. 塑料器皿： 吸头、枪头、胶塞、移液管（10ml）、15ml离心管、冻存管（1～2ml）。
4. 其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。
5. 试剂：D-Hanks液、胎牛血清、培养液、双抗（青霉素、链霉素）、胰蛋白酶（0.08%）、1NHCl、7.4%NaHCO3、DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油。
细胞冻存：
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。
2、取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
3、离心1000 rpm,5 min。
4、去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
6、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min；当温度达到-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
细胞复苏：
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。
3. 离心， 1000 rpm，5 min。
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。
5. 次日更换一次培养液，继续培养。
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项目成果
