实验常用试剂的制备与储藏(二)
100×Denhardt试剂(Denhardt's regent)
依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)
将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。
100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液
20%PEG 8000/2.5M NaCl
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi
条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman
1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)
按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L
的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L
磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
TE(用于悬浮和贮存DNA)
Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。