双荧光素酶验证
miR 和LncRNA/circRNA/mRNA 结合双荧光素酶验证方案
一、 检测原理
全基因合成 miR 潜在结合位点上下游~500bp（ LncRNA、circRNA 或 mRNA 的3’UTR）野生形式 WT 及结合位点的突变形式 Mut，克隆到 psiCHECK-2 多克隆位点处（1640-1674）（图 1），然后与 miR 的 mimics/NC 共同转染 293T 细胞测定荧光素酶读值即可。
图 1 双荧光素酶载体示意图
二、 载体构建与 Mimics 合成
1.构建 WT miR 潜在结合位点到 psiCHECK-2 载体，命名为 WT；
2.构建 Mut miR 潜在结合位点到 psiCHECK-2 载体，命名为 Mut（突变模式：A/T 与 G/C 互变）；
3.合成待测 miR 的 Mimmics 及阴性对照 NC。
三、 实验分组信息
四、 预期实验结果
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