为什么有些目的蛋白 WB 很难检测到目标条带？
很多时候检测不到目的条带的问题竟都是出在样本制备这一步。质粒有没有转染到细胞中去，转进去后有无表达，表达量是否足以用 WB 检测，目的蛋白是否容易降解？想要得到最佳实验结果，了解清楚这些问题比一遍一遍优化和改进 WB 操作本身更为重要。
相信若非首次接触 WB 实验的科研同行，每人都应有一套成熟的实验方案可行而有效，若目的蛋白检测不到，可适当根据 CST 推荐的操作步骤优化调整，但更需要的，还是在蛋白制备上下功夫，可参考如下：
1. 选择最佳转染方法。
2. 检测 mRNA 水平。
3. 提取蛋白的细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂防止蛋白降解；如果需要检测磷酸化蛋白，请加入磷酸酶抑制剂。
4. 测定蛋白表达量，低表达的蛋白需要浓缩目的蛋白样本至可检测浓度, 确认你的上样量达到 20 μg。
5. 考虑刺激处理是否合理。
6. 通常我们建议采用超声处理细胞和组织提取物，而且超声对于研究细胞核和核染色质相关蛋白至关重要，如组蛋白 H3。
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