游离凝固酶
金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌），在空气、水、土壤等外环境中广泛存在，人和动物的鼻腔、咽喉、皮肤和肠道中金葡菌的携带率也较高。在一定条件下，金葡菌可致人体局部及全身感染并引起中毒性休克，其肠毒素可致食物中毒。
金葡菌的致病因子众多，包括溶血素、肠毒素、凝固酶等。溶血素作为金葡菌的外毒素，是造成金葡菌感染最重要的致病因子，溶血素能损伤红细胞、血小板，破坏溶酶体引起局部缺血和坏死。研究发现，金葡菌菌株溶血素基因的携带率很高，但其溶血的表现却差别很大。金葡菌溶血的表现以完全透明大溶血圈的β溶血为主，也有菌株表现为α溶血，还有相当多的金葡菌不溶血。另外，在葡萄球菌属中，不少菌株如中间葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、表皮葡萄球菌等，也有溶血现象。
金黄色葡萄球菌肠毒素 （S.aureus enterotoxins，SE） 是由金葡菌分泌的一类能够引起急性胃肠炎的蛋白质，SE具有很强的耐热性，食物的通常蒸煮过程并不能使SE完全变性，SE还能抵抗胃肠道中蛋白酶的水解作用。产肠毒素金葡菌引起的食物中毒，是食源性疾病的常见类型，也是食品中金葡菌检验关注的重点。
多数金葡菌菌体表面有结合的凝固酶（聚集因子），更多的金葡菌能分泌游离的凝固酶，游离凝固酶是一种胞外酶。凝固酶的致病性，主要表现在使菌体包被纤维蛋白而抵抗吞噬细胞的吞噬作用。检测结合的凝固酶一般用玻片法，而试管法则可以检测游离凝固酶以及结合的凝固酶。由于凝固酶试验阴性的金葡菌极少，试管法也成了鉴定金葡菌的通用方法，但是某些菌株，如中间葡萄球菌、海豚葡萄球菌、施氏葡萄球菌凝固亚种的试管法凝固酶试验也为阳性。因此从理论上讲，国内外食品中金葡菌检验方法，检验的一般都是凝固酶阳性的葡萄球菌(coagulase-positive staphylococci)。有研究发现，金葡菌的凝固酶阳性与产肠毒素还有较高的符合率，产肠毒素者主要是凝固酶阳性的菌株。
金葡菌对高温处理工艺和常用的食品防腐剂非常敏感，食品中金葡菌的数量高，既指示原料的污秽不洁，也表示食品加工过程的质量卫生状况不佳。另外金葡菌的数量越高，存在产肠毒素菌株的可能性越大。所以，金葡菌的数量也是食品安全标准中常见的限量指标。
由于溶血现象并不是金葡菌的敏感特征，目前因为进食而造成人体局部或全身感染金葡菌的报道也并不多见，而且溶血试验阳性与金葡菌产肠毒素之间并无相关性。因此，国外食品中金葡菌检验的权威方法，并未采用溶血试验来鉴别金葡菌。
由于血浆凝固酶试验是鉴定金葡菌的“金标准”，以下详细介绍试管法血浆凝固酶试验的注意事项。
1、待测菌应来自培养18-24小时的纯培养物，生长不良或培养时间过长的菌株，可能因凝固酶的活性低而出现阴性结果。
2、最好使用EDTA等不易被细菌分解的抗凝剂。因为肠球菌等细菌能分解柠檬酸盐，从而导致用柠檬酸盐抗凝的血浆出现凝集现象。此外，由于人血浆中存在金葡菌的抗体，绵羊血浆中凝固酶反应因子浓度低，一般采用兔血浆作为凝固酶的检测试剂。
3、接种细菌后，轻轻转动（不要摇动）试管进行混匀，并于36℃培养6小时。由于一些金葡菌能产生大量的纤维蛋白酶使凝块溶解，特别是溶解在培养早期出现的凝块而导致阴性结果，为此必须每30分钟观察一次结果，尤其是在培养的头一个小时。另外，有些金葡菌产生的凝固酶量比较少，培养6小时未能出现凝集，需要继续培养至24小时才可观察到凝集现象。
4、轻轻倾斜（不要摇动）试管以观察结果，最好根据凝集情况采用评分法对结果进行判断。未出现凝集者，血浆凝固酶试验为阴性；评分为3+以上者，判断为血浆凝固酶试验阳性；评分为1+、2+者，需要将待测菌重新纯培养后，重复一次血浆凝固酶试验，或采用耐热核酸酶试验、甘露醇发酵等其他方法对菌株进行确认。需要指出的是，一些大肠埃希氏菌能发酵甘露醇，且在血浆凝固酶试验中出现弱凝集，此时可通过染色镜检来进行区分。
5、采用金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的质控菌株，分别作为血浆凝固酶试验的阳性和阴性对照。
6、血浆凝固酶试验的试管法结果与玻片法结果，有时并不完全一致。如施氏葡萄球菌施氏亚种的玻片法为阳性，试管法却为阴性。
