不同抗凝剂对血小板聚集的处理结果及分析
EDTA-K2 作为血常规检验的常用抗凝剂,具有对白细胞、红细胞形态影响极小,并可抑制血小板的聚集等优点,但它有时会诱导血小板体外黏附、聚集,使血细胞自动分析仪不能正确识别,导致血小板计数明显低于正常值,从而导致血细胞自动分析做血小板计数时出现血小板假性减低的现象,这就是EDTA依赖性假性血小板减少症( EDTA-PTCP)。现将近期工作中遇到的典型病例报道如下。
1 临床资料
1.1 一般资料 选取2008年1月—2009年3月血小板计数结果异常减低的病例6 例,其血小板计数结果均≤50 ×109/L ,且临床反馈信息与临床症状严重不符,查体未见皮肤紫癜、牙龈出血、鼻出血、胃肠道及泌尿系统出血等症状。骨髓穿刺结果显示增生活跃,巨核细胞无明显异常,成熟巨核细胞数量不少,血小板成堆分布。
1.2 方法
1.2.1 法 分别采用EDTA-K2、肝素及枸橼酸钠抗凝的真空采血管空腹抽取肘正中静脉清晨静脉血2. 0 mL,使用System XE-2100全自动分析仪进行检测。
1.2.2 手工法 目视计数法,床边采血使用许汝和稀释液即时稀释,按全国操作规程进行计数。
1.2.3 血液涂片法 取静脉血制成血液涂片1张,干燥后使用瑞氏染色法进行染色,下观察。
2 结果
2.1
3种抗凝剂血小板检测结果 EDTA-K2 抗凝剂血小板检测结果( 29 ～ 68 ) ×109/L (报警信息中提示Plt CLUMPS)
,肝素抗凝剂血小板检测结果( 100 ～162 ) ×109/L ,枸橼酸钠抗凝剂血小板检测结果(102～172) ×109/L
,手工法血小板检测结果(121～201) ×109/L ,血液涂片法在显微镜下可以观察到血小板有明显聚集成簇现象(每簇中血小板数目大于6个)
,少见血小板单独存在。见表1(略)。
2.2 复检 选取其中1例与临床联系后重新采用EDTA -K2 抗凝剂抽血立即上机检测,血小板检测结果103 ×109/L ,并且分别于抽血后1 h、2 h、3 h、4 h上机检测,血小板检测结果依次为88 ×109/L , 67 ×109/L, 42 ×109/L, 21 ×109/L。
3 讨论
据文献报道, EDTA-PTCP在住院患者的发生率为0. 09%～0. 21% ,在门诊的血小板减少患者中,其比例可高达17%。发生机制是由于在EDTA-K2 作为抗凝剂的前提下出现的介导血液中冷抗血小板自身抗体,使血小板互相发生凝集现象 。Bragnani 等认为, EDTA 可导致血小板活化,因而改变血小板膜表面某种隐匿性抗原构象,与存在于血浆中的自身抗体结合,激活PLA、PLC、AA、ADP、5-HT 等活性物质。这些活性物质又能活化血小板纤维蛋白原受体,促使血小板与纤维蛋白原聚集成团,出现使血小板互相凝集现象。这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb /Ⅲa上,同时这种与血小板结合的自身抗体Fc 端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc 受体结合,出现卫星现象。其可能与血浆中的抗血小板抗体和抗心磷脂抗体等自身抗体有关,但无任何病理、生理意义,也与特殊药物使用无关,多发生在肿瘤患者、自身免疫病、肺心病、晚期孕妇、肝病、毒血症及一些不明原因的疾病。血细胞自动分析仪是根据血小板的体积大小及通过微孔时产生的脉冲数计数的,当血小板互相发生凝集时,会致使一些血小板被误认为小红细胞而不纳入血小板计数范围,使血小板计数减少。此种情况一旦发生,会导致临床进行大量的下一步检查,甚至导致误诊、误治。如果怀疑EDTA-PTCP发生时,可以采用不同的方法进行复检: ①目前用于评价血小板计数准确性的参考方法是血小板手工计数法,虽然其精密度较差,有时对血小板与某些非特异性颗粒也难以辨别,但对于异常血小板结果的复检,仍不失为一种方便有效的方法。②直接用EDTA-K2 抗凝血标本进行血涂片,干燥后使用瑞氏染色法进行染色,显微镜下观察血小板的分布情况,如果见到血小板大量凝集,可进一步复检确诊。③可以换用肝素及枸橼酸钠等非EDTA-K2抗凝剂进行血小板计数复检,虽然计数结果与手工计数结果仍存在一些差异,不能作为最后结果报告临床,但其对于排除EDTA-K2 引起的血小板聚集是一种非常可取的方法。
