免疫磁珠分离法的原理和操作办法
一、免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)
1、原理
用包被在磁珠上的抗 E.coli O157:H7 特异性抗体捕获样品增菌液中的目标菌,然后在磁场作用下将磁珠从增菌液中沉淀,以磷酸缓冲液反复清洗,从而使 E.coli O157:H7 ,与样品中的其他成分及细菌分离,并将分离出的 E.coli O157:H7 菌体定量于一定体积,在具体应用中,还可加入适量的碱性鱼精蛋白(0.005mg/mL)以降低非靶菌体在玻璃试管壁的残留。
2、仪器设备及试剂
包被有抗 E.coli O157:H7 特异性抗体的免疫磁珠,免疫磁珠分离架,培养箱,均质器,mEC肉汤,山梨醇麦康凯培养基等。
3、操作方法
①增菌培养
在225mL mEC肉汤内加入25g 样品,36℃±1℃培养18~24h。
②磁珠分离
将一定量的磁珠(根据产品的说明决定)加入增菌肉汤中,充分搅拌混匀,让目标菌充分结合在磁珠上。将培养瓶放在分离架上,使磁珠吸附在培养瓶中靠分离架磁板的一面,倒掉培养液,将磁珠洗下。
③培养
将洗下的磁珠倒入山梨醇麦康凯平板中,让磁珠在培养基的表面滚动,使磁珠上吸附的 E.coli O157:H7 ,释放在培养基表面。再将平板放入培养箱内培养24h,取出观察菌落特征再进一步确认。
推荐