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cDNA浓度的测定

2023.2.17

理论上讲,等质量是必要的。
但是就反转录结果而言,里面的成分太多,测量浓度的误差比较大。
我们实验室一般都是测量RNA的浓度,然后取等量RNA、过量oligo
dT做充分反转录,再取等量反转录体系做PCR。
另外,我看你用条带定量?这样很不准确,因为你也不知道PCR多少循环后达到饱和。比方说,组间差8倍,差异很明显了,但也不过就差3个循环而已。你说减少了PCR循环数,但是也不能保证减少到合适的程度。一组在10个循环饱和,一个在13个循环饱和,你从20个循环减少到15个循环,条带还是一样亮。
强烈建议做Real-time
PCR,用实时定量曲线去看组间有没有变化,这样就没有循环数的问题了。另外,由于内参的存在,也就没有cDNA浓度问题了。

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