ELISA试验中设置阴性、阳性、空白对照的作用(2)
3．计算NCx、PCx有效性与统计控制应用
读者如果注意到NCx与PCx有效性计算规则，很有点像电视上的“去掉一个最小值、去掉一个最大值”的评分办法，就知道统计学上的异常值“粗略”取舍法，把3个对照值中的1个最小、或最大“异常值”剔除，再重新计算余下的2个对照值的平均值。这样，不但可以比较前、后试验的各次反应板之间的NCx与PCx的波动状态，用这样的NCx、PCx去绘制控制图，也可以减少因为含有异常值的平均值造成的“假失控”机率。况且，无论是单值控制图、或是均值控制图，质控数据中是不应当含有“异常值”数据的。
4．ELISA试验统计控制如何借鉴PCx有效性计算与应用，拟在另文中讨论。
四．计算P-N与N-P差值的意义用途
1．国际品牌的EIA试剂，很注重观测阳性与阴性（P-N）、或阴性与阳性（N-P）对照均值之间的差值，以及P/N（或N/P）比值与C.O.I.指数的比较，并把它视为：在评价试剂质量或判断试验结果有效性时是不可或缺的评价指标。我用雅培的EIA乙肝试剂为例列表如下（见附表4—1）：
附表4—1 HBsAg（a、b、d法）抗—HBsHBeAg抗—HBe抗—HBc抗—HBc-IgM
CutoffNCx+0.05NCx+0.05NCx+0.060.5(NCx)+0.5(PCx)0.4(NCx)+0.6(PCx) 0.25(PCx)+NCx
P-N或N-P≥0.400≥0.300≥0.300≥0.300≥0.300≥0.300
1.027-0.010=1.0171.447-0.027=1.4201.202-0.035=1.1671.083-0.040=1.0431.065-0.0481.0170.846-0.045=0.801
P/N（或N/P）与A/C.O.（或C.O./A）比较
P/N=1.027/0.01=102.7A/C.O.=1.027/0.06=17.121.447/0.027=53.591.447/0.077=18.791.167/0.2533.341.167/0.095=12.28N/P=1.083/0.040=27.08C.O./A=0.562/0.01=14.051.065/0.045=23.670.453/0.045=10.07P/N=0.846/0.045=18.8A/C.O.=0.846/0.257=3.29
例如：HBsAg的P-N要求≥0.400（A、B、C法），其它各项试剂要求＞0.400或0.300。P-N或N-P意义是：如果小于0.400或0.300，需考虑试验操作有误；如复试后仍小于0.400或0.300，则考虑试剂失效。
同样说法，用P/N或N/P比值与C.O.I.指数的比较，也是提供实验者观测实验结果是否有效、可否成立的参考水平。
—敬请注意，国内有的EIA试剂配套提供的阳性（PC）或阴性（NC）对照物含量过高，达到、甚至超过部临检中心临床高值血清的含量。此时，不能参与上述的N-P、或P-N的标准进行评价。
2．可以反过来提问：国际品牌试剂说明书就如此可靠、可信吗？我的答复是：实际用过国际品牌试剂后，您就会获得如下感受和观点：如此详细的试剂使用说明书，就相当于一份相当完整的质量保证指导书，正如<生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》>中所郑重声明的：14 性能特点当按照说明书正确操作、结合适当的检测仪器以及相关附件或者生物梅里埃公司的设备时，生物梅里埃公司保证这个体外诊断试剂正确的实验性能。请大家体会一下，国际品牌试剂竟有如此胆量、敢于公开做出如此的书面承诺，靠的是什么？就是当前的一句名言：靠品牌意识、靠ISO的质量管理和保证。
至于说明书中提供的计算举例（附表4—2），包括：NCx=0.091，清除异常的质控对照，确定PC1-NCx≥0.600、PC2-NCx≥0.600、PC3-NCx≥0.400，计算界限值（Cut off）等等，其引用的具体数据，不是臆造、不是写着好看的，而是参照正常的实验数据举例演算、可供用户参考对比的。如果您的实验数据与附表4—2中举例的数据相差太大、太离谱，它可以提示您“多加思考、找找原因”。如果有网友也在用生物梅里埃公司的HIV试剂，不妨用您的实验数据对照一下，是不是这个情况，向大家说说。
3．如果再注意说明书上的其它信息，例如说明书中的表2、3、4、5都是很值得细看和推敲的：（1）HIV—抗体阳性样品诊断敏感性：不仅是3个100%，而且更要注意它的阳性样本的数量是445、200和303份（附表4—3），这可是颇为可观的样本数量哦！如果该公司选用的抗体阳性样本是按照WHO的要求预先已经用蛋白印迹法确认为HIV—1、2、型抗体和抗原阳性血清，那么，附表4—2敏感性的3个100%是很有“高度”指导价值的。
附表4—3 抗体阳性样品的诊断敏感性
样本数量敏感性
445份HIV—1抗体阳性标本100%
200份HIV—2抗体阳性标本100%
303分HIV抗原阳性100%
（2）再看分析特异性附表4—4提示多达4796例的献血员标本特异性竟然有99.9%！如果是按照WHO的要求，可参考Bull.WHO.70(6)：751-，1992；72（1）：129-，1994，这4796例献血员标本事前经过蛋白印迹法确认是HIV阴性样本的话，那么，附表4—3的3个100%，才是真正的顶级国际水平，实在令人惊喜。再看附表4—5列举人血清中对于ELISA检测会产生“非特异性干扰”的9种物质（成份）检测全部“阴性”的结果，也很有临床参考价值。这2幅附表提供如此重要的敏感性和特异性的数据信息，在国产试剂说明书中是难以查悉的。
五．阳性与阴性灰带
此处所指阳性与阴性灰带率%，既是试剂本身的质量评价指标，也是判断待检样本中是否有需要重复复检的可疑样本范围（Sample Retest Range），及各批/次试验时可疑样本占有率。例如雅培EIA乙肝试剂的阳性与阴性灰带%要求如下：HBsAg定为0.0%，意思是：不应当有阳性或阴性“灰带”样本；其余各项目都是10.0%。这又是一个负责任的对试剂质量标准的公开承诺！
这儿说的“灰带”，就是：待检样本判为“可疑”的S/C.O.=1.00＋/－10%的范围、该样本需要复检。
六．笔者附注：.
笔者一点感想：我90年开始接触ELISA，当时详细讲解ELISA的书籍并不多。随后的数年中，借助应用过几个品牌进口试剂的机会，从反复阅读原版试剂说明书中逐渐地悟出了有关EIA试剂质量的一些“理解与心得”。这些“理解与心得”，从当时的国产试剂说明书上是难以查询获得的。我写这一段话，意思是希望朋友们，是否找一篇国际上标准的EIA试剂使用说明书细细地读一读，比如生物梅里埃中国有限公司的中文版《人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）使用说明书》，并与国产ELISA试剂说明书对比着看看，我想大家一定会有不同的感受。
