影响薄层吸附色谱仪分析中展开的因素
影响薄层吸附色谱仪分析中展开的因素有水蒸气、溶剂蒸气、温度、展开方式、展距和展开槽的放置等。
一、水蒸气:
在薄层吸附色谱的展开过程中,空气的相对湿度和展开槽中的水蒸气必须严格控制,微量的水能对色谱分离结果产生较大的影响。硅胶薄层板吸附水蒸气的速度很快,200×200×0.25mm(长×宽×高)的薄层板在相对湿度为50%的环境中约3min后失去一半活性,15min后吸附的水分已达到最大值,因此,点样速度的快慢,空气相对湿度的大小,都可以影响分离效果和重现性。
适宜的相对湿度范围也决定于溶质和溶剂的极性。
二、溶剂蒸气:
薄层吸附色谱的薄层展开后,位于薄层板边缘的样品斑点比移值较处于中间的斑点大的现象称为边缘效应。
边缘效应会使斑点扩散变形,影响样品定性结果的判断。薄层扫描定量时,斑点的形状直接影响到扫描后的峰高和峰宽,从而影响定量结果的准确性。
预饱和是减少边缘效应的有效办法。预饱和是指在展开槽内加入展开剂后,密闭放置15~30min,待溶剂蒸气平衡后,迅速将点有样品的薄层板放入,立即密闭,展开。必要时可放置适当大小的滤纸促使展开槽内蒸气达到饱和。
三、温度:
温度对薄层吸附色谱的展开比对纸色谱的影响小,温度从20℃变到4℃既不影响展开时间,也不影响Rf值。除有特殊规定外,薄层吸附色谱的展开可在室温下进行。
四、展开方式:
不同的展开方式和展开条件对薄层吸附色谱的分离效果有明显影响。
五、展距:
普通薄层展距为10~20cm,薄层展距为5~10cm。在这种展距内得不到分离的组分,增加展距并不是解决问题的方法,因为分离度仅正比于展距的平方根。在一般展距内分离不满意时,不能一味增加展距,可以改变展开方式或优化展开剂,以得到理想的分离结果。
六、展开槽的放置:
展开槽应放在水平、稳定的实验台上,不能有阳光直射,不能放在通风处,应离开热源,避免温度波动,光敏物质的分离应将展开槽置于暗处进行。