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补体结合反应（1）

2020.9.14

[原理 ] 抗原与抗体结合形成的复合物能激活补体，若抗原是绵羊红细胞，那么补体被激活后，使绵羊红细胞溶解，出现溶血现象。补体结合实验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。参与本反应的五种成分可分为两个系统，一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）另一个为指示系统，即绵羊红细胞和其相应的溶血素。待检抗原，抗体和先加入的补体作用后，再加入指示系统。若待检系统中的抗原 - 抗体相对应，两者特异性结合后激活补体，再加入的指示系统无补体结合，不出现溶血，是为补体结合实验阳性；若待检系统中的抗原与抗体不对应或缺少一方，补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞 - 溶血素复合物激活补体，产生溶血现象，是为补体结合实验阴性。

本实验敏感性，特异性均较高，可用于检测某些病毒病，立克次体病，梅毒病等。由于参与反应的各成分之间要求有适当的量的关系，因此，做本实验之前必须通过一系列预备实验来确定补体，溶血素，抗原或抗体的使用量。

[ 方法 ]

一）溶血素单位滴定

1 材料：溶血素血清，抗原， 2% 绵羊红细胞悬液，补体（1:30 取豚鼠新鲜血清），生理盐水，小试管，吸管,37 ℃水浴箱。

2 实验过程

1 ）按表分别加入各种不同稀释的溶血素 0.2ml 及其他成分。

2 ）充分混匀后置于 37 ℃水浴箱中 30 分钟，然后观察结果。

3 ）能呈现完全溶血的最高稀释度的溶血素为 1 个单位

4 ）配制 2 个单位的溶血素溶液。

例如下表的结果表明，第11管（1:9600 倍稀释）中0.2ml溶血素为1个单位。实验室常用0.2ml中含2个溶血单位的稀释液，即1:4800,配制时可以取 1:100 倍稀释的溶血素1ml 加生理盐水47ml 。

例：溶血素的滴定表 :

试管号	溶血素 0.2ml 稀释度	补体 (1:30)	生理盐水	2% 绵羊红细胞		结果
1	1 ： 1000	0.2	0.4	0.2	37 ℃ 致敏血球水浴 30 分钟	完全溶血
2	1 ： 1200	0.2	0.4	0.2	完全溶血
3	1 ： 1600	0.2	0.4	0.2	完全溶血
4	1 ： 2000	0.2	0.4	0.2	完全溶血
5	1 ： 2400	0.2	0.4	0.2	完全溶血
6	1 ： 3200	0.2	0.4	0.2	完全溶血
7	1 ： 4000	0.2	0.4	0.2	完全溶血
8	1 ： 4800	0.2	0.4	0.2	完全溶血
9	1 ： 6400	0.2	0.4	0.2	完全溶血
10	1 ： 8000	0.2	0.4	0.2	完全溶血
11	1 ： 9600	0.2	0.4	0.2	完全溶血
12	1 ： 12800	0.2	0.4	0.2	完全溶血
13	1 ： 16000	0.2	0.4	0.2	完全溶血
对照	—	0.2	0.4	0.2	完全溶血