PriCells: 原代血管内皮细胞、Angiogenesis、VEGF
PriCells: 原代血管内皮细胞、Angiogenesis、VEGF
血管内皮细胞是位于循环血液与血管壁内皮下组织之间的单层细胞。血管内皮细胞在血栓与止血、血管新生、辐射损伤、炎症及免疫反应等一系列重要的病理生理过程起着重要的作用。脐静脉内皮细胞培养和鉴定方法：采用胰蛋白酶行脐静脉两次酶灌注消化法获取内皮细胞。
分别在倒置相差显微镜、透射电镜下观察，SP免疫组化法行Ⅷ因子抗原鉴定。观察血管内皮细胞体外培养的生长情况，并绘制细胞生长曲线。
血管内皮细胞生理功能
1、内分泌功能：内皮细胞能通过膜受体途径感知血流动力学变化和血液传递的信号，并在接受物理和化学刺激后合成和分泌多种血管活性物质，这些介质在局部作用于血管，从而发挥生物学效应。
2、抗血栓作用：内皮细胞分泌的前列环素是强效的血小板聚集抑制剂。一些激活血小板的刺激物如二磷酸腺苷(ADP)、三磷酸腺苷(ATP)同时也刺激内皮细胞释放前列环素,从而抑制血小板栓子的形成。此外，内皮细胞受去甲肾上腺素、凝血酶、血管加压素或血管内血流淤滞等刺激，可能还分泌人组织纤溶酶原激活剂(t-PA),具有明显的纤溶作用。
3、调节血管张力：在药物和生理因素的刺激下，内皮合成释放一系列舒张或收缩血管的物质，调节其下平滑肌的紧张度。此外，内皮细胞还具有调控血小板、白细胞与血管壁的相互作用；控制血管生长；介导炎症和免疫反应；调节脂质氧化；调控血管渗透性等功能。
Angiogenesis和VEGF
1971年，Folkman提出了“肿瘤生长依赖血管形成”，控制肿瘤生长的新途径-抗血管新生（anti-angiogenesis）治疗的设想。血管新生（angiogenesis）是内皮细胞的激活、增殖、迁移、血管基底膜的降解、血管和血管网的形成；并且已存在的血管网的连接等复杂过程。
1989年Gospodarowicz等从牛的垂体滤泡细胞中分离出一种能选择性促进血管内皮细胞分裂的蛋白质，将其称为血管内皮生长因子（VEGF，也称为VEGF-A）。随后，发现了VEGF的其他家族成员：VEGF-B、C、D和胎盘生长因子（PIGF）。
VEGF可由多种细胞分泌，如内皮细胞、平滑肌细胞及一些间质和基质细胞。VEGF在成人和动物的正常组织中合成很少，但在胎儿、胎盘、黄体及大部分人类肿瘤等存在血管新生的组织中高表达。 VEGF也是增加血管通透性的物质之一。
微血管对蛋白的通透性的增加是血管形成的关键。血浆蛋白的漏出和血管外纤维蛋白基质的形成为内皮细胞生长、迁移所必需的。
VEGF在血管新生中起重要作用：
（1） VEGF通过增强小血管内皮细胞内的囊泡、细胞器、囊状结构的活性来促进血管腔内和腔外血浆成分代谢，以及通过对钙粘蛋白/链蛋白复合体的作用使单层内皮细胞之间的粘附连接松解，从而提高循环代谢中小血管通透性。血管通透性增加可使血浆蛋白外渗并形成细胞外基质，引起内皮细胞和基质细胞的转移。
（2） VEGF刺激内皮细胞产生纤溶酶原激活物(uPA和tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）和胶原酶，并使蛋白分解增加而引起血管外基质成分改变，为内皮细胞迁移创造条件。
（3） VEGF刺激内皮细胞增殖，VEGF仅可刺激内皮细胞增殖，而不能刺激其他类型细胞如角膜内皮细胞、晶状体上皮细胞、纤维母细胞及肾上腺皮质细胞的增殖。
（4） VEGF促进内皮细胞的迁移，这是从血管前体形成内皮分支重要的一步。
（5） VEGF抑制内皮细胞的凋亡。
肿瘤或眼球内血管新生中VEGF的作用
（1） VEGF是主要的肿瘤血管新生因子。VEGF mRNA在大量的人肿瘤上调。在鼠模型中抑制VEGF活性导致肿瘤细胞系生长的抑制。
（2） VEGF抑制剂用于肿瘤病人的临床实验，包括人源化的抗-VEGF抗体、抗-KDR抗体和KDR信号转导的各种小分子抑制剂。
在非小细胞肺癌和转移的直肠结肠癌的病人，抗-VEGF抗体与常规化疗结合应用可延长生存期。抗-VEGF抗体单药应用于复发转移的乳腺癌病人显示有临床疗效。小分子的KDR抑制剂-SU5416的临床实验证实对转移的直肠结肠癌病人有效。
（3） 与年龄有关的黄斑变性（AMD）中肿瘤样血管形成是视觉减退的主要原因，并导致完全失明。AMD相关的脉络膜肿瘤样血管形成的进展中起主要作用。
