气相色谱仪操作和肌醇含量测定

2020.6.30

　　对一个混合试样成功地分离，是气相色谱仪操作分析的前提和基础。而其中气相色谱分离条件的选择至为关键。主要涉及以下几个方面：

　　气相色谱仪操作和肌醇含量测定

　　1.载气对柱效的影响：

　　载气对柱效的影响主要表现在组分在载气中的扩散系数Dm(g)上，它与载气分子量的平方根成反比，即同一组分在分子量较大的载气中有较小的Dm(g)。根据速率方程：

　　（1）涡流扩散项与载气流速无关；

　　（2）当载气流速u小时，分子扩散项对柱效的影响是主要的，因此选用分子量较大的载气，如N2、Ar，可使组分的扩散系数Dm(g)较小，从而减小分子扩散的影响，提高柱效；

　　（3）当载气流速u较大时，传质阻力项对柱效的影响起主导作用，因此选用分子量较小的气体，如H2、He作载气可以减小气相传质阻力，提高柱效。

　　2.载气流速（u）对柱效的影响：

　　从速率方程可知，分子扩散项与流速成反比，传质阻力气相色谱仪项与流速成正比，所以要使理论塔板高度H最小，柱效最高，必有一最佳流速。对于选定的色谱柱，在不同载气流速下测定塔板高度，作H-u图。

　　H-u图曲线上的最低点，塔板高度最小，柱效最高。该点所对应均流速即为最佳载气流速。在实际分析中，为了缩短分析时间，选用的载气流速稍高于最佳流速。

　　3.柱温的选择

　　柱温是影响气相色谱仪操作的重要参数之一，主要影响来自于K、k、Dm(g)、Ds(l)；从而直接影响分离效能和分析速度。

　　在实际分析中应兼顾这几方面因素，选择原则是在是在难分离物质对能得到良好的分离，分析时间适宜且峰形不托尾的前提下，尽可能采用较低的柱温。同时，选用的柱温不能高于色谱柱中固定液的最高使用温度。对于沸程宽的多组分混合物可采用“程序升温法”，可以使混合物中低沸点和高沸点的组分都能获得良好的分离。

　　肌醇又称环己六醇，是维生素类药物及降气相色谱仪血脂药，可促进肝及其他组织中的脂肪代谢，用于脂肪肝、高血脂症的辅助治疗。由于肌醇分子中缺乏合适的生色团和电活性基团，难以直接用通常的分析方法来进行测定。

　　在国家标准中肌醇含量测定方法有重量法、微生物法和高碘酸钾氧化法，亦有HPLC法和GC法。微生物法和重量法操作繁琐、费时，重量法测定肌醇及其制剂的含量时,还存在用样量大、且需在氯仿萃取后挥去氯仿，有损健康；高碘酸钾氧化法则要严格控制加热氧化的时间一致，否则测定结果将会有很大的误差；而HPLC法，采用末端吸收进行检测，误差较大。鲁创仪器采用将肌醇硅烷化处理，正己烷提取后,以程序升温气相色谱仪测定肌醇的含量，方法简单，结果准确。

　　气相色谱法测定所需仪器与试剂

　　仪器：气相色谱仪GC-9860配置FID检测器，色谱柱，工作站，气源，数控超声清洗器，25ml具塞试管。

　　试剂：正己烷、无水硫酸钠、二气相色谱仪甲基甲酰胺均为分析纯(二甲基甲酰胺用前需减压蒸馏除去水分)；三甲基氯硅烷，六甲基二硅胺烷，肌醇对照品、肌醇样品。

　　气相色谱仪测定肌醇含量时需注意的几个方面

　　1)由于肌醇分子中缺乏合适的生色团和电活性基团,难以直接用通常的分析方法测定。考虑到肌醇环状饱和多羟基的结构特征，选择将其进行硅烷化处理，以正己烷提取后进行气相色谱分析。分别选用几种硅烷化试剂，以及不同比例进行测试比较，确定选用二甲基氯硅烷与六甲基二硅胺烷以1∶3混合作为衍生化试剂，效果较佳。

　　2)因肌醇硅烷化后气化温度较高，进样室温度选择为260℃；试验发现,肌醇硅烷化处理后有较多的杂峰，柱温采用恒温操作时，若柱温太高，溶剂峰未回至基线,主峰就已出柱，且将杂峰包在其中；若柱温太低,则分析流程长，且峰形严重拖尾；而选择程序升温操作，不仅可使杂峰与主峰达到较好分离，且峰形较好，保留时间适当。

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