制备DNA测序模板实验——小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和λ琼脂糖平板上，通过在平板上裂解适于λ噬菌体生长的大肠杆菌菌株，制备重组λ噬菌体毒种原液。
4. 4℃高速离心10 min，弃上清。再于4℃高速离心2 min，用拉细了的巴斯德吸管吸去残余上清。
5. 重悬噬菌体沉淀于500 μl SM 培养液，加入55 μl 10%SDS，0.5 μl 0.5 mol/l EDTA，轻轻混匀，于65 ℃保温15 min，不时轻轻摇匀溶解所有沉淀物。
8. 加入50 μl 3 mol/l pH7.0乙酸钠缓冲液，随后加入550 μl 异丙醇，于-20℃冰冻30 min。
9. 于4 ℃高速离心15 min，吸出并弃上清，晾干DNA沉淀。
11. 用于测序时，在碱溶液中变性0.1~0.3 pmol DNA（2~4 μg）。 |
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