自动生化分析仪基本参数及应用(3)
五、波长的选择及测定模式
波长（Wave1ength)的正确选择有利于提高测定的灵敏度和减少测定误差。光度学方法有单波长和双波长之分，有的仪器可用三波长、甚至多波长，以及两波长比率等。有的仪器可作导数光谱分析。单波长测定易受样品溶血、黄疸、脂浊等因素干扰。双波长测定可以通过副波长加以修正，减少甚至消除干扰因素，提高测定准确性。采用同光束双波长，亦有利于排除光源强度变化对结果的影响。
1．测定波长选择有三个主要条件： 本文来自检验地带网
(1)待测物质在该波长下的光吸收最大。
(2)其吸收峰宜较宽而钝，而不是处于尖峰或陡肩，一般不选光谱中的末端吸收峰，换句话说，该吸收峰处的吸光度随波长变化较小。
(3)常见干扰物在该波长下的光吸收最小。试剂盒说明一般已提供波长参数。实际波长选择需要了解待测物质和干扰组分对不同波长单色光的吸收程度，即以波长为横坐标、吸光度为纵坐标作吸收光谱曲线(光吸收曲线)。
采用透射免疫比浊法，免疫复合物大小约35~100mn之间，于波长290~410nm下有最大吸收峰，常取340nm；如用胶乳增强免疫浊度法，理想的检测波长可增至可见光区。
2．双波长测定当待测物质与干扰组分的吸收光谱互相重叠、出现非特异光吸收，或因反应液混浊出现光散射时，可以采用双波长(或多波长)测定。双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差(△A)计算。双波长选择常见：血红蛋白340nm和380nm波长吸光度相同，以NADH或NADPH作为测定底物或产物的试验常采用340／380nm；有的也．采用340／405nm。ALP和GGT常使405/476nm，Trinder反应多选取520／600nm或550/660nm．免疫比浊常选用340／700nm等。
连续监测法中，要注意双波长测定有两种类型的机型：主波长全程监测副波长单点监测，和双波长全程监测。不仅因为后者的准确性优于前者，而且因为酶活性测定的K值计算与波长及摩尔吸光系数有关，更显重要。
副波长单点监测：试剂和样品混合后，双波长只测一点，此后只用主波长连续监测；计算时，全部x主吸光度值均减去同一λ副吸光度值。K值计算代入主波长摩尔吸光系数即可。机型如Monarch1000，TechniconRA1000等。
双波长全程监测：全程每～测定点均用双波长同测，并各自用λ主吸光度值减去λ副吸光度值。因为所测指示酶或产物在λ副波长时也存在一定的吸光系数，K值计算代入的摩尔吸光系数值应采用ε主减去ε副。如NADH的ε为6．22×10，为1．33×10，ALP产物ε为18.5x×10，ε为0.2×10很小；GGT产物在副波长处无吸光系数。
