染色末端的清洁纯化实验
试剂、试剂盒 乙醇洗脱上样液
仪器、耗材 磁性分离装置平板夹平板架测序反应纯化系统
实验步骤
一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
用于测序的胶洗脱/上样液 (见表 9-4)
90% 乙酵洗涤液
2. 特殊设备
MagnaBotⅡ磁性分离装置（Promega)
平板夹 96(Promega)
平板架（Promega)
3. 其他
WizardMagneSil 测序反应纯化系统（Promega; 包括 MagneSilGREEN[顺磁性顆粒])
96 孔板
二、方法
1. 将 96 孔板装到平板夹 96 中 [图 9-10(a)、（b)]。
2. 使用平板架 [图 9-10(c)] 将平板放置在自动机械工作台上。
3. 剧烈振荡瓶以重悬 MagneSil 顆粒，每 20ul 测序反应体系中加入 180ulMagneSil颗粒。
4. 室温下温育 5 min, 期间分别在 0、2.5 min 和 5 min 时进行抽吸混合。
5. 将板放到 MagnaBotⅡ磁性分离装置 [图 9-10(d)] 上以捕获颗粒。
6. 移弃液体，避免损失任何颗粒。
7. 从 MagnaBotⅡ设备上取出板，置于平板架上。
8. 每个样品中加入 100ul90% 的乙醇。
9. 室温下温育 5 min, 期间分别在 0、2.5 min 和 5 min 时进行抽吸混合。
10. 将板放到 MagnaBotnⅡ磁性分离装置上以捕获颗粒。
11. 移弃液体，避免损失任何顆粒。
12. 重复步骤 7~11 使总洗涤次数达到 2 次。
13. 顆粒在室温下风干约 10 min。
14. 加适量洗脱/上样液（表 9-4)。
15. 室温下温育 1~2 min。
16. 将板放到 MagnaBotnⅡ磁性分离装置上以捕获顆粒。
17. 将已纯化的测序反应体系转移到干净的 96 孔板，小心以避免损失任何顆粒。
