关于多聚赖氨酸的配制、保存、使用总结与问题-2
八、使用说明
操作步骤（可直接在玻片上涂布）
1.灭菌的ddH2O 1:10稀释该多聚赖氨酸溶液。
2.用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度到室温18-26℃
3.将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。
4.在60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用。
九、注意事项
1.每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张， 超过90张片子将影响其黏合力。
2.用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含1% HCl的70%乙醇溶液来清洗。
3.不要在用过的稀释液中加新的溶液。
4.释过的多聚赖氨酸溶液要放在2-8℃，至少在3个月内是稳定的。
5.用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃。
十、将0.5%多聚赖氨酸溶液加入细胞培养皿中，浸泡5-10分钟并自然晾干待用即可。
十一、多聚赖氨酸(poly-l-lysine)：常用包被培养皿的基质之一.。
1.配制硼酸缓冲液（PH8.4）
A液：硼砂溶液－－1.907g溶于100ml三蒸水（0.05M）
B液：硼酸溶液－－1.237g溶于100ml三蒸水（0.2M）
4.5mlA液＋5.5mlB液＝硼酸缓冲液（PH8.4）
2.多聚赖氨酸5mg溶于50ml硼酸缓冲液中，配成100μg/ml的多聚赖氨酸溶液。过滤除菌，－20度保存。
3.使用时4倍稀释，可以重复使用3次！
十二、听说一般买来的多聚赖氨酸都是用了做免疫组化时用的，一般都加了防腐剂，不利于细胞培养。所以我以前都是自制鼠尾胶原。请教midas主任，不知道这种说法是否正确？
答:我不知道别的地方PLL的来源，不过我们这里是sigma的粉剂，而且注明是for cell culture。
如果多聚赖氨酸中有防腐剂那么肯定不适合细胞培养！
十三、一些参考书上有的用三蒸水，有的用PBS配置，这与你说的很有出入，是不是三种配法都可以？不知道那一种更合理些？
答：其实都可以，不过这是推荐的方法！（用硼酸缓冲液）
十四、主任，按照您的配方，多聚赖氨酸的使用浓度应该是0.025mg/ml，目前我们实验室的使用浓度是0.1mg/ml，这个浓度来源于上海脑所．我想请问一下，我们用的浓度是否偏高，我培养的是大鼠星形胶质细胞，如果用您推荐的浓度，细胞是否容易贴壁．谢谢！
答：有些文献上也是用的0.1mg/ml，但是我们在实际工作中用0.025mg/ml是完全可以的。
方法是至少包被4h以上，过夜也可以（可重复用3次）！之后无菌水清洗，晾干后即可使用。
用于配养细胞的多聚赖氨酸分子量要求>70,000，一般常见的分子量有70,000～150,000，150,000～300,000
和>300,000，分子量越大，黏附力越强，但相对完全溶解较困难，所以我推荐使用150,000～300,000比较好。
多聚赖氨酸的工作浓度各家文献报道相差很大，从0.25 mg/ml到0.01mg/ml都有，因为多聚赖氨酸对细胞有毒性，所以在保证贴附的前提下，浓度越低越好，还省钱。我现在用的是0.01mg/ml。
多聚赖氨酸的配制浓度在各个书上不一，我也在做原位杂交，浓度是0.01mg/ml比较好吧
十五、请问多聚赖氨酸（150000——300000）如何配置？保存？工作浓度？
答：多聚赖氨酸应该是避光保存的．
我们实验室使用的方法如下，希望对你有用：
多聚赖氨酸（Poly-L-Lycine,PLL）
试剂：多聚赖氧酸 5g
蒸馏水 1000ml
配制方法：称取PLL，溶于H2O，充分混合即可，此液浓度为0.5%，可适当稀释配成0.01～0.5%浓度。4℃保存，也可 -20℃备用。PLL可反复冰冻，效果无明显影响，工作液常再稀释10～50倍。
我的使用方法如下：
先配制成10mg/ml的浓缩液，使用前按照1：80稀释，制成工作液，浓度25ug/ml,可用于包被培养皿。
