新冠病毒核酸检测PCR技术知识点梳理（二）
定量PCR，也就是qPCR,由于其英文全称是real-time quantitative polymerase chain reaction，有些也称为RT-qPCR，国外通常简称为qPCR,是由美国Applied Bisystems公司于1996年研制出的一种新型核酸定量技术，并随着荧光PCR 仪的推出而逐渐得到广泛应用。也是现在常用于临床检验的PCR技术，该技术在常规PCR 基础上运用荧光共振能量转移现象( fluorescence resonance energy transfer, FRET) 技术, 加入荧光标记探针, 巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起, 在PCR 指数扩增期间通过连续监测荧光信号的强弱来即时测定特异性产物的量, 并据此推断目的基因的初始量。
RT-PCR,实际上是反转录PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），又称逆转录PCR。国际上的约定俗成的是：RT-PCR 特指反转录 PCR，而 Real-time PCR 一般缩写为 qPCR（quantitative real-time PCR）
RT-PCR原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录称cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因的表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。
RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用检测细胞、组织中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特点基因的cDNA序列等。如果用于定量检测，就是上文提到的qPCR， 此次新冠病毒核酸检测荧光PCR技术，就是基于此。
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新冠病毒核酸检测试剂盒优势：
特异识别和检测新冠病毒SARS-CoV-2
适用于人痰液、鼻液、咽拭子样本
可信度高、即用型、快速出结果 < 2 hr
新冠病毒核酸检测试剂盒检测原理图示：
新冠病毒核酸检测试剂盒组分：
| 新冠病毒全套核酸PCR检测试剂盒（货号#K1460-100） | |
| 中文名 | 英文名 |
| 2X qPCR主要预混物 | 2X qPCR Master Mix |
| 反转录预混物 | Reverse Transcription Mix |
| PCR引物和探针套装 | PCR Primer/ Probe set |
| 缓冲液 | Rehydration Buffer |
| 新冠病毒阳性对照 | COVID-19 Positive control (PTC) |
| 阴性对照 | Non-Template Negative Control (NTC) |
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新冠病毒一步法PCR检测试剂盒检测原理：是基于一步法反转录实时定量PCR技术（real-time RT-PCR）,通过反转录病毒RNA实现快速高效的检测新冠病毒(SARS-CoV-2)
新冠病毒一步法PCR检测试剂盒（货号#08-65-00250）组分：
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组分 |
规格 |
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| 50rxn | 250rxn | 5000rxn | |
| 40xOne-step SOLIScript® CoV Mix | 25ul | 125ul | 2.5ml |
| 5x One-step Probe CoV Mix | 200ul | 1ml | 20ml |
| Nuclease-free water | 1.25ml | 5ml | 100ml |
小编福利：如果想要获取新型冠状病毒核酸检测引物和探针序列（Specific primers and probes for detection 2019 novel coronavirus）可以参考
中国国家疾病控制中心
