细胞冻存的操作要点（一）
做实验的时候为什么要进行细胞冻存呢？
细胞冻存有哪些好处呢？
1. 节省实验室空间、时间、经费
2. 若实验失败，还有重来的机会
3. 确保重复实验的一致性
4. 确保未来实验的连贯性
但是，经常会有用户反映，细胞冻存与复苏遇到了问题，看似简单的一步其实并不简单。
那么如何做好细胞冻存呢？今天跟随我们一起来了解一下细胞冻存时需要注意的事项和技巧吧。
细胞冻存的基本原理
细胞代谢过程需要各种蛋白酶的参与，而这些蛋白酶在环境温度低于-70℃时会集体罢工，低温贮藏的目的是通过超低温使细胞代谢活动近乎停止。细胞因此进入休眠状态，使细胞“不会老”，所以可以长期保存。
因为冻融过程对所有细胞和组织都是有一定伤害的，因此，需要开发出有效的技术来防止细胞死亡和损伤。
▲ 细胞冻存过程
低温保护剂可保护细胞不受细胞内冰冻影响，目前多采用DMSO，甘油，乙二醇和丙二醇等渗透型低温保护剂。它们的作用机制包括：自由进入细胞，取代水，使冰点下降，充当盐的二次溶剂，提高细胞膜对水的通透性。如下图所示：
▲ 使用和不使用冻存液对比图
但是，部分低温保护剂在缓慢冷冻过程中虽然会保护细胞，却也会引起细胞毒性，尤其是在室温下。因此，在标准的自制冻存液中，会含有血清，因为血清可以降低细胞毒性。但，血清并不是完美的成分：
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血清的优势 |
血清的缺点 |
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有助于保护细胞 |
含有生长因子，激素等未知成分 |
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不推荐用于细胞库，临床应用 |
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增加污染几率 |
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成本波动 |
▲ 血清优缺点比较
那么有无动物源成分替换物吗？
甲基纤维素也被认为是细胞冷冻保存的保护剂，所以可作为胎牛血清的替代物。
优势：
化学成分明确
有保护性
▲ 甲基纤维素结构图
尽管大多数研究和医学领域都存在优化的冷冻保存方案和已发表的配方，但技术问题依然存在。
冻存液的选择
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