分子杂交技术-Northern杂交的简介
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤维素滤膜上,然后与探针杂交。
1、材料:待检测的RNA及制备好的探针。
2、设备:电泳仪,电泳槽,塑料盆,真空烤箱,放射自显影盒,X-光片,杂交袋,硝酸纤维素膜或尼龙膜。
3、试剂:
(1)20×SSPE:175.3g NaCl, 88.2g柠檬酸钠,溶于800ml水中,用10mol/LNaOH调pH至7.4,定溶到1L。
(2)其他试剂:与Southern杂交试剂类似,只是所有的试剂均应用DEPC处理。
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